Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Симбиоз и его роль в эволюции 10
1.2. Растительно-микробные взаимодействия 12
1.2.1 .Трофические симбиозы 12
1.2.2.Защитные симбиозы 16
1.3. Бобово-ризобиальный симбиоз
1.3.1. Значение бобово-ризобиального симбиоза 17
1.3.2. Сигнальное взаимодействие между симбионтами 19
1.3.3. Симбиотические гены растений 19
1.3.4. Симбиотические гены бактерий
1.3.4.1. Организация и экспрессия ш/-генов 26
1.3.4.2. Горизонтальный перенос симбиотических генов бактерий 32
1.3.5. Авторегуляция 35
Глава 2. Материалы и методы исследования 38
2.1. Объекты исследования, бактериальные штаммы и векторы 38
2.2. Методы исследований
2.2.1. Выделение чистых культур клубеньковых бактерий 39
2.2.2. Хранение штаммов ризобий 40
2.2.3. Выделение и очистка ДНК ризобий 40
2.2.4. Выделение и очистка плазмидной ДНК 41
2.2.5. Полимеразная цепная реакция 43
2.2.6,Олигонуклеотидные праймеры, использованные при проведении ПНР
2.2.7. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами 46
2.2.8. Аналитический гель-электрофорез ДНК з
2.2.9. Препаративный гель-электрофорез ДНК 48
2.2.10. Элюция ДНК из агарозного геля 48
2.2.11. Обработка ДНК щелочной фосфатазой и полинуклеотидкиназой фага Т4 50
2.2.12. Подготовка химически компетентных клеток Е. coli и Enterobacter ц 51
2.2.13. Трансформация компетентных клеток Е. coli и Enterobacter sp. плазмидной ДНК 51
2.2.14. Секвенирование ДНК на автоматическом секвенаторе 52
2.2.15.Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 53
2.2.16. Подготовка электрокомпетентных клеток клубеньковых бактерий 53
2.2.17. Электропорация компетентных клеток ризобий 53
2.2.18. Выделение и очистка РНК рекомбинантных клубеньковых бактерий 54
2.2.19. Синтез кДНК 55
2.2.20. Определение нитрогеназной активности бактерий
2.3. Реактивы и материалы 56
2.4. Составы использованных стандартных водных растворов 57
Глава 3. Результаты и обсуждение 58
3.1. Филогенетический анализ симбиотических генов 58
3.2. Маркеры для поиска клубеньковых бактерий на основе симбиотических генов 67
3.3. Получение штамма ризобий с конститутивной экспрессией генов нитрогеназного комплекса 72
Заключение 81
Выводы 82
Список литературы
