Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Основные аспекты адаптации организмов к неблагоприятным условиям окружающей среды
1.2. Классификация и функции БТШ
1.3. Структура и эволюция генов ТШ
1.4. Экспрессия генов ТШ и ее регуляция
1.5. Участие БТШ в адаптации к экстремальным условиям
1.6. БТШ в медицине
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.1.1. Геномная фаговая библиотека
2.1.2. Насекомые, условия обитания и теплового шока
2.1.3. Штаммы E. coli
2.1.4. Ферменты рестрикции
2.1.5. Зонды
2.1.6. Линии эукариотических клеток, условия культивирования и ТШ
2.2. Методы:
2.2.1. Скрининг геномной фаговой библиотеки
2.2.2. Выделение ДНК бактериофага
2.2.3. Расщепление ДНК рестрицирующими эндонуклеазами
2.2.4. Электрофорез ДНК
2.2.5. Построение рестриктных карт рекомбинантных фагов
2.2.6. Включение радиоактивной метки в ДНК
2.2.7. Перенос и гибридизация по Саузерну
2.2.8. ПЦР-анализ
2.2.9. Выделение фрагментов ДНК из геля
2.2.10. Клонирование фрагментов ДНК
2.2.11. Трансформация компетентных клеток
2.2.12. Выделение плазмидной ДНК
2.2.13. Секвенирование ДНК
2.2.14. Анализ последовательностей
2.2.15. Выделение фракции лимфоцитов из крови верблюда
2.2.16. Выделение тотальной РНК
2.2.17. 5’- и 3’-RACE анализ и ПЦР с обратной транскрипцией
2.2.18. Электрофорез РНК
2.2.19. Нозерн-гибридизация
2.2.20. Двумерный электрофорез белков по О’Фарреллу
2.2.21. Диск-электрофорез белков с ДДС-Na (по Лэммли) и окрашивание гелей по Кумасси G-250
2.2.22. Идентификация белков методом пептидного фингерпринтинга
2.2.23. Экспрессия и очистка белка GAF
2.2.24. Получение белковых экстрактов
2.2.25. Анализ связывания факторов транскрипции с элементами теплового шока (EMSA)
2.2.26. Получение репортерных конструкций
2.2.27. Трансфекция плазмид и измерение интенсивности люминесценции
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Клонирование и анализ структуры кластера генов hsp70A1 у верблюда Camelus dromedarius
3.2. Дифференциальный анализ экспрессии генов hsp1A, hspA1B и hspA1L
3.3. Клонирование и анализ структуры кластера генов hsp83 у S. singularior и O. pardalina
3.4. Сравнение последовательностей генов hsp83 и hsp70 у Stratiomys singularior и Stratiomys japonica
3.5. Анализ экспрессии генов hsp83 у S. singularior и O. pardalina
3.6. Сравнительный анализ структуры промоторных областей генов группы hspA1 верблюда и других видов млекопитающих
3.7. Сравнение активности промоторов hsp70 C. dromedarius и H. sapiens в культуре клеток HEK293
3.8. Сравнительный анализ структуры промоторных областей генов hsp70 и hsp83 S. singularior и O. pardalina
3.9. Сравнение активности промоторов hsp70 S. singularior и D. melanogaster в культуре клеток D. melanogaster Schneider2
3.10. Эффект вставки GAGA-сайтов в промотор гена hsp70S3
3.11. Сравнение активности промоторов hsp83 S. singularior и D. melanogaster в культуре клеток Schneider2
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы
Приложение
Благодарности
