Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 15
1.1. Пандемии гриппа: краткий обзор .15
1.2. Механизмы формирования эпидемических/пандемических вирусов гриппа 17
1.2.1. Гипотезы о возникновении пандемических штаммов 22
1.2.2. Гипотезы «вымирания» пандемических штаммов 25
1.3. Пандемический грипп A(H1N1)pdm09 .27
1.3.1. Краткий обзор событий пандемии 2009-2010 гг. в мире и в РФ 27
1.3.2. Биологические свойства вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 32
1.3.3. Эволюция и механизмы изменчивости вирусов гриппа A(H1N1) и A(H1N1)pdm09 42
1.3.3.1. Вирусы гриппа A(H1N1) 1918-2009 гг 42
1.3.3.2. Изменчивость НА вирусов гриппа A(H1N1) 1918-2009 гг. выделения и роль позитивной селекции 52
1.3.3.3. Эволюционная изменчивость НА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 54
1.3.3.4. Биологические свойства и эволюционная изменчивость NA вирусов гриппа A(H1N1) и A(H1N1)pdm09 .59
1.4. Заключение 66
ГЛАВА 2: Материалы и методы исследования .67
2.1. Материалы исследования 67
2.2. Методы исследования 71
ГЛАВА 3: Собственные исследования 79
3.1. Особенности выделения и антигенная характеристика вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 79
3.1.1. Выделение вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 с использованием клеточных линий MDCK, MDCK-Siat1, CaCo-2 и куриных эмбрионов .79
3.1.2. Заключение з
3.2. Сравнительный анализ биологических свойств пандемических вирусов гриппа a(h1n1)pdm09 и других вирусов гриппа а птиц, животных и человека 88
3.2.1. Особенности репликации вирусов гриппа птиц, животных и человека в перевиваемых культурах клеток .88
3.2.1.1. Отбор и восстановление музейных штаммов вирусов гриппа А 89
3.2.1.2. Сравнительное изучение репродукции вирусов гриппа А на клеточных культурах человека и животных 91
3.2.2. Особенности гибели перевиваемых клеток человека в культуре при инфицировании вирусами гриппа птиц, животных и человека 95
3.2.2.1. Изучение апоптоза в клеточных линиях человека с использованием световой люминесцентной микроскопии и красителя Hoechst-33258 .95
3.2.2.2. Использование биохимических маркеров для выявления апоптоза, индуцируемого вирусами гриппа А, в клеточных линиях человека 98
3.2.3. Характеристика активности NA вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 в сравнении с другими вирусами гриппа птиц, животных и человека 101
3.2.4. Заключение .105
3.3. Антигенный анализ вирусов гриппа A(H1N1)pdm09, выделенных в 2009-2013 гг 106
3.3.1. Сравнение данных антигенного анализа, полученных с использованием хорьковых и крысиных антисывороток 106
3.3.2. Антигенный анализ вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 2009-2013 гг. Выделения 110
3.3.3. Изучение антигенных свойств вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 с использованием крысиных антисывороток, полученных к современным вирусам гриппа A(H1N1)pdm09, выделенным на куриных эмбрионах и культуре клеток MDCK 119
3.3.4. Антигенные карты для вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 .122
3.3.5. Заключение .124
3.4. Генетическое разнообразие вирусов гриппа a(h1n1)pdm09, определяемое поверхностными белками вируса гриппа 126
3.4.1. Анализ аминокислотного состава НА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 в
период с 2009 по 2013 гг .126
3.4.2. Роль мутации D222G в НА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 и ее взаимосвязь
с тяжелыми случаями течения гриппа 138
3.4.3. Оценка сайтов позитивной селекции в молекуле НА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09. Филогенетические группы 141
3.4.4. Анализ аминокислотного состава NА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09 в период с 2009 по 2013 гг 146
3.4.5. Оценка сайтов позитивной селекции в молекуле NА вирусов гриппа A(H1N1)pdm09. Филогенетические группы 154
3.4.6. Заключение .157
Глава 4. Обсуждение 158
Глава 5. Заключение 183
Список литературы
