Введение
Глава 1. Структура вируса гриппа
1.1 Гемагглютинин
1.2 Нейраминидаза
1.3 Мембранный белок М2
1.4 Мембранный белок Ml
1.5 Нуклеопротеин
1.6 РНК-зависимая-РНК-полимераза
1.6.1 Белок РВ1
1.6.2 Белок РА
1.6.3 Белок РВ2
1.7 Неструктурные белки NS1 и NS2 (NEF)
1.7.1 Неструктурный белок NS1
1.7.2 Неструктурный белок NS2 (NEF)
Глава 2 Структурно-функциональные свойства эндотелия кровеносных сосудов человека
2.1 Анатомо-физиологическая характеристика
2.2 Роль эндотелия в раннем воспалительном ответе
2.2.1 Адгезионные молекулы
2.2.2 Вазодилататоры
2.2.3 Вазоконстрикторы
2.2.4 Сосудистый эндотелий и система фибринолиза
Глава 3. Дисфункция эндотелия
Изменение секреторной активности эндотелия 56
Апоптоз эндотелиальных клеток 57
Взаимосвязь процессов апоптоза, гемостаза и воспаления 59
Вирусные инфекции и эндотелий 61
1 ДНК-содержащие вирусы 61
2 РНК-содержащие вирусы 63
Материалы и методы 70
Вирусы 70
Клеточные культуры 71
1 Культура эндотелиальных клеток человека линии EAhy926
2 Культура клеток MDCK 72
Методы оценки репродукции вируса гриппа типа А 72
1 Определение инфекционной активности вируса гриппа 72
2 Полимеразная цепная реакция 73
3 Электронная микроскопия 74
Иммуногистохимический анализ аутопсийного материала 74
Выделение поверхностные белков исследуемых вирусов гриппа типа А 75
Оценка метаболизма эндотелиальных клеток линии EAhy926 с помощью МТТ-теста 76
Определение активности каспазы-3 иммуноцитохимиче-ским методом
Оценка жизнеспособности эндотелиальных клеток линии EAhy926 78
Выявление раннеапоптотических эндотелиальных клеток линии EAhy926 78
Определение активности тканевого активатора плазмино-гена
Определение активности тканевого активатора плаз-миногена в эндотелиальных клетках линии EAhy926
Определение активности тканевого активатора плаз-миногена in vivo
Компьютерный поиск сходных аминокислотных последовательностей в белках человека и вирусе гриппа
Статистическая обработка полученных данных
Результаты собственных исследований
Репродукция вируса гриппа типа А в эндотелиальных клетках
Инфекционная активность исследуемых штаммов вируса гриппа в культуре клеток EAhy926
Выявление РНК, исследуемых штаммов вируса, в культуре клеток EAhy926 с помощью ПЦР
Выявление вирусных частиц исследуемых штаммов вируса, в культуре клеток EAhy926 электронно-микроскопическим методом
Иммуногистоцитохимическое исследование аутопсийного материала от больных, умерших в эпидемию гриппа gg 2009-2010 гг.
Иммуногистохимический анализ аутопсийного материала легких
Иммуногистохимический анализ аутопсийного материала мозга
Иммуногистохимический анализ аутопсийного материала сердца
Дисфункция клеток эндотелия при воздействии исследуемых вирусов гриппа и их поверхностных белков
Электронно-микроскопический анализ морфологии клеточной культуры эндотелия, инфицированной вирусом гриппа 97
Изменение метаболизма эндотелиальных клеток линии EAhy926 при воздействии исследуемых штаммов вируса гриппа типа А и его поверхностных белков
2.2.1 Изменение метаболизма эндотелиальных клеток линии EAhy926 при воздействии исследуемых штаммов вируса гриппа типа А 97
2.2.2 Изменение метаболизма клеток эндотелия при воздействии гемагглютинина исследуемых штаммов вируса гриппа 99
2.2.3 Изменение метаболизма клеток эндотелия при воздействии нейраминидазы вируса гриппа А/Брисбейн/10/2007 (H3N2) и А/курица/Курган/5/05 NS1-81/5:3(H5N1) 102
104
2.3 Апоптоз клеток эндотелия под воздействием вируса гриппа типа А и его поверхностных белков
2.3.1 Активация каспазы-3 в клетках эндотелия под воздей ствием исследуемых штаммов вируса гриппа и его по верхностных белков 104
105
2.3.1.1 Активация каспазы-3 в клетках эндотелия под воздействием исследуемых штаммов вируса гриппа
2.3.1.2 Активация каспазы-3 в клетках эндотелия под воздействием поверхностных белков исследуемых штаммов вируса гриппа 107
2.3.2 Оценка жизнеспособности эндотелиальных клеток ли нии EAhy926 под воздействием вируса гриппа типа А и его поверхностных белков 108
2.3.2.1 Оценка жизнеспособности эндотелиальных клеток линии EAhy926 под воздействием исследуемых штаммов вируса гриппа типа А. 108
2.3.2.2 Оценка жизнеспособности эндотелиальных клеток линии EAhy926 под воздействием гемагглютинина исследуемых штаммов вируса гриппа 110
2.3.2.3 Оценка жизнеспособности эндотелиальных клеток линии EAhy926 при воздействии нейраминидазы исследуемых штаммов вируса гриппа 111
2.3.3 Выявление аннексии V положительных клеток в культуре клеток эндотелия EAhy926 под воздействием вируса гриппа типа А и его поверхностных белков 114
2.3.3.1 Выявление аннексии V положительных клеток при инфицировании клеток EAhy926 исследуемыми штаммами вируса гриппа 114
2.3.3.2 Выявление аннексии V положительных клеток при воздействии на клетки EAhy926 нейраминидазы ви- ^ 16 руса гриппа типа А подтипов H3N2 и H5N1
2.3.3.4 Выявление аннексии V положительных клеток при воздействии на клетки EAhy926 гемагглютинина 11 q
исследуемых штаммов вируса гриппа
Оценка активности тканевого активатора плазминогена под влиянием вируса гриппа типа А и его поверхностных белков 120
2.4.1 Оценка активности тканевого активатора плазминогена в эндотелиальных клетках линии EAhy926 под влиянием исследуемых штаммов вируса гриппа типа А 120
2.4.2 Оценка активности t-PA в эндотелиальных клетках EAhy926 под влиянием гемагглютинина исследуемых 121 штаммов вируса гриппа
2.4.3 Оценка активности t-PA под влиянием гемагглютинина исследуемых штаммов вируса гриппа in vivo -. ~~
2.4.4 Оценка активности t-PA в эндотелиальных клетках EAhy926 под влиянием нейраминидазы вирусов А/Брисбейн/10/2007 (H3N2) и А/курица/Курган/5/05 123 NS1-81/5:3 (H5N1)
2.4.5 Оценка активности t-PA под влиянием нейраминидазы вируса А/Брисбейн/10/2007 (H3N2) in vivo
Сравнение последовательностей аминокислот тканевого активатора плазминогена и поверхностных белков вирусов гриппа подтипов H5N1, H3N2 и HINlpdm 09. 125
Обсуждение 134
Выводы 146
Библиографический список
