Введение
1 Введение 5
1.1 Актуальность темы исследования 5
1.2 Степень разработанности проблемы 6
1.3 Цели и задачи исследования 7
1.4 Научная новизна результатов исследований 8
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы 8
1.6 Методология и методы исследования 9
1.7 Положения, выносимые на защиту 10
1.8 Личный вклад соискателя 10
1.9 Степень достоверности и апробация результатов работы
1.10 Публикации 10
1.11 Объем и структура диссертации 11
2 Обзор литературы 12
2.1 Африканская чума свиней, эпизоотологическая ситуация 12
2.2 Разнообразие изолятов и штаммов вируса АЧС 15
2.3 Современная классификация изолятов и штаммов вируса АЧС 17
2.4 Структура вириона 21
2.5 Характеристика основных, структурных и диагностически значимых белков вируса АЧС 25
2.6 Характеристики изолятов и штаммов вируса АЧС 30
2.7 Основные направления разработки специфических средств профилактики АЧС 33
2.8 Клонотеки генов в изучении возбудителя АЧС 38
2.9 Заключение по обзору литературы 43
3 Собственные исследования 45
3.1 Материалы 45
3.2 Методы 49
4 Результаты собственных исследований з
4.1 Создание клонотеки генов вируса АЧС 55
4.1.1 Определение расположения и направления считывания ОРС генов B646L, CP204L, KP177R, 061R, EP402R, CP530R, CP2475L и E183L в полноразмерном геноме вируса АЧС штамма Грузия 2007/1 55
4.1.2 Подбор праймеров и оптимизация параметров ПЦР 56
4.1.3 Клонирование генов вируса АЧС 59
4.1.4 Клонотека генов вируса АЧС изолята Krasnodar06/12 60
4.2 Использование клонотеки генов для создания продуцентов 66
4.2.1 Клонирование копии гена K177R в экспрессирующей плазмиде рЕТ32Ь(+) 66
4.2.2 Анализ экспрессии р22 в клетках Е.coli 67
4.2.3 Анализ нуклеотидных последовательностей генов вируса АЧС 71
4.3 Изучение культурально-биологических свойств изолята Krasnodar 06/12 и
адаптация его к репродукции в перевиваемых культурах клеток 81
4.3.1 Выделение вируса АЧС из патологического материала и первичный анализ свойств изолята Krasnodar 06/12 81
4.3.2 Изучение биологических свойств изолята Krasnodar 06/12 4.3.3 Патологоанатомические изменения у свиней, зараженных изолятом Krasnodar 06/12 вируса АЧС 86
4.3.4 Сравнительный анализ молекулярно-биологических свойств изолятов вируса АЧС, выделенных на территории РФ в 2007-2013 гг 86
4.3.5 Адаптация изолята Krasnodar 06/12 к репродукции в перевиваемых культурах клеток 90
4.3.6 Изучение биологических свойств вируса АЧС, изолята Krasnodar 2/13, адаптированного к росту в перевиваемой культуре клеток РК-15 92
4.4 Получение аттенуированного варианта вируса АЧС 93
4.4.1 Аттенуация изолята Krasnodar 2/13, адаптированного к росту в перевиваемой культуре клеток РК-15 93
4.4.2 Изучение возможности использования адаптированного штамма для приготовления культурального антигена для постановки ТФ ИФА 97
4.4.3 Использование культурального антигена вируса АЧС для постановки РНИФ 101
4.5 Обсуждение результатов 103
5. Заключение 112
5.1 Выводы 112
5.2 Практические предложения 113
5.3 Перспективы дальнейшей разработки темы 1 6
Список сокращений 115
Список литературы 118
