Введение
РАЗДЕЛ I. Обзор литературы 15
Введение 15
Глава I. Морфология ядерного матрикса соматических клеток 19
1.1. Немембранные компоненты ядерной оболочки, входящие в состав ядерного матрикса 19
1.2. Интерхроматиновые фибриллярно-гранулярные компоненты ядерного матрикса 21
1.3. Остатки ядрышка, ;:Входящие в состав ядерного матрикса. 23
1.4. Гранулярные структуры ядерного матрикса 25
1.5. Влияние метода изоляции на структуры ядерного матрикса 27
1.6. Заключение 30
Глава 2. Химический и ферментный состав ядерного матрикса 32
2.1. Введение 32
2.2. Химический состав ядерного матрикса 32
2.3. Белки ядерного матрикса, изолированного
из разных клеток и тканей 34
2.3.1. Полипептиды "ламины" или триплета ядерного матрикса 37
2.3.2. Тиоловые группы белков ядерного матрикса. 40
2.3.3. Металлопротеиды ядерного матрикса 44
2.3.4. Фосформирование белков ядерного матрикса 45
2.4. Ферментный состав ядерного матрикса 47
2.5. Заключение... 50
Глава 3. Биологическая роль ядерного матрикса 51
3.1. Введение 51
3.2. К вопросу о биогенезе белков ядерного матрикса 51
3.3. Ассоциация ядерного матрикса с ДНК 58
3.3.1. Краткая историческая справка 58
3.3.2. Ассоциация ново-реплицированной ДНК с ядерным матриксом 62
3.3.3. Фракция ДНК, сохраняющаяся в составе ядерного матрикса 63
3.3.4. Белковый компонент комплекса ДНК-белок ядерного матрикса 66
3.4. Ассоциация ядерных рибонуклеопротеидов
с ядерным матриксом 72
3.4.1. Ассоциация с ядерным матриксом ДНК-подобной РНК 74
3.4.2. К вопросу об ассоциации рибосомных РНК с ядерным матриксом 77
3.4.3. Заключение 79
3.5. Ассоциация стероидных гормонов с ядерным матриксом 79
3.6. Ядерно-цитоплазматический транспорт и его связь со скелетными структурами ядра.... 80
3.7. Заключение 86
Глава 4. Ядерный матрикс гамет 87
Глава 5. Скелетные структуры хромосом 89
Глава 6. Скелетные структуры ядра в течение митоза и клеточного цикла 92
Глава 7. Дцерный матрикс при опухолевом росте 95
Глава 8. Ядерный матрикс при вирусной инфекции клеток.. 97
Общее заключение по литературному обзору 99
РАЗДЕЛ II. Экспериментальная часть 101
Глава 9. Материал и методы исследования 101
9 Л. Материал исследований 101
9.2. Метод выделения ядер из клеток печени крысы 102
9.3. Изоляция ядер из опухолевых клеток 103
9.4. Изоляция ядер из клеток культуры фиброблас-тов китайского хомячка. 104
9.5. Контроль чистоты и морфологической сохранности изолированных ядер 105
9.5.1. Световая микроскопия 105
9.5.2. Электронная микроскопия 105
9.5.3. Отношение РНК/ДНК в препарате ядер...105
9.6. Метод изоляции ядерного матрикса 106
9.7. Фракционирование ядерного матрикса 107
9.8. Изоляция ядерной оболочки .....108
9.9. Получение ядерных белковых фракций 108
9.10. Электрофорез белков ядерного матрикса в поли акриламидном геле, содержащем додецилсульфат натрия 109
9.11. Инкубация клеток с мечеными аминокислотами НО
9.12. Инкубация клеток с мечеными аминокислотами в присутствии антибиотиков 112
9.13. Определение радиоактивности в жидкостном сцинтилляторе III
9.14. Определение радиоактивности на фильтровальных бумажках 112
9.15. Определение радиоактивности во фракциях геля после электрофоретического разделения белков 112
9.16. Определение концентрации белка 113
9.17. Элюирование белка из полиакриламидного геля ИЗ
9.18. Иммунологические методы исследования 114
9.18.1. Получение антигенов и иммунизация...114
9.18.2. Преципитация по Приру 115
9.18.3. Титрование антител. 115
9.18.4. Анализ антител двойной радиальной иммунодиффузией по Ухтерлони 116
9.18.5. Электроиммунный анализ по Лореллу...117
9.18.6. Электрофоретический Перенос белков с полиакриламидного геля на нитро-целлюлозную мембрану с последующей окраской их антителами 117
9.18.7. Непрямая иммунофлуоресцентная микроскопия 118
9.18.8. Иммунопероксидазная окраска 119
9.18.9. Дополнительная обработка клеток при непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии
9.19. Определение транспорта белка, меченого Ни-фенилаланином, из ядра в бесклеточной системе 120
9.20. Техника электронномикроскопического исследования 122
9.20.1. Метод ультратонких срезов.... 122
9.20.2. Метод негативного контрастирования..122
9.20.3. Метод сканирующей электронной микроскопии .122
9.20.4. Метод з амораживания-травления 123
9.21. Список реактивов, использованных в работе..123
Глава 10. Морфология изолированного ядерного матрикса..125
Глава 11. Фракционирование ядерного матрикса 134
Глава 12. Химический состав ядерного матрикса печени крысы 142
12Л. Химический состав ядерного матрикса 142
12.2. Белковый состав четырех фракций ядерного матрикса 150
Глава 13. Иммунологическая характеристика белков ядерного матрикса печени крысы 156
13.I. Иммунологический анализ белков-антигенов ядерного матрикса 157
13.2. Исследование локализации антигенов непрямой иммунофлуоресцентной микроскопией с антителами к щелоченерастворимым белкам ядерного матрикса печени крысы 164
13.3. Влияние химических реагентов на локализацию антигенов ядерного матрикса 170
13.4. Локализация антигенов ядерного матрикса в митотической клетке ....175
Глава 14. Ядерный матрикс регенерирующей печени крысы..180
Глава 15. Ядерный матрикс опухолевых клеток 184
15.1. Введение. 184
15.2. Особенности белкового состава ядерного матрикса опухолевых клеток 185
15.3. Фракционирование ядерного матрикса опухолевых клеток 195
Глава 16. Биогенез белков ядерного матрикса ...200
16.1. Введение. 200
16.2. Включение меченых аминокислот тотальным белком ядерного матрикса и его фракциями...201
16.3. Включение меченых аминокислот электрофо-ретическими фракциями ядерного матрикса....205
16.4. Влияние ингибиторов белкового синтеза на включение меченых аминокислот в белки ядерного матрикса. 209
16.5. Заключение 221
Глава 17. Биогенез поровых комплексов 225
17.1. Введение. 225
17.2. Изменение плотности поровых комплексов на поверхности ядра 225
17.3. Автономность поровых комплексов от мембран ядерной оболочки 228
17.4. Разнообразие поровых комплексов, наблюдаемое на поверхности ядерного матрикса
и интактного ядра 232
17.5. Биохимические и иммунологические данные исследования поровых комплексов 240
17.6. Заключение. 243
Глава 18. Обсуждение 247
18.1. Введение 247
18.2. Исследование структурных компонентов ядерного матрикса. 248
18.2.1. Морфологические исследования ядерного матрикса различных клеток и тканей 248
18.2.2. Биогенез поровых комплексов 252
18.2.3. Иммуноцитохимические исследования фракции фиброзного слоя и ассоциированных с ним поровых комплексов....259
18.3. Белковый состав ядерного матрикса различных клеток и тканей 260
18.3.1. Белки ядерного матрикса печени крысы и его фракций..... 260
18.3.2. Белковый состав ядерного матрикса в клетках с различной метаболической и пролиферативной активностью.270
18.3.3. Биогенез белков ядерного матрикса...275
18.3.3.1. Включение меченых аминокислот в тотальные
белки ядерного матрикса...276
18.3.3.2. Распределение меченых аминокислот между белками ядерного матрикса, разделенными электрофорезом..278
18.3.3.3. Влияние ингибиторов белкового синтеза на включение меченых аминокислот в полипептиды ядерного матрикса 280
18.4. Белки ядерного матрикса в митотической клетке 284
Выводы 287
Список литературы 293
