Введение
Глава 1. Обзор литературы. Комбинированные вакцинные препараты. Методы специфической оценки компонентов вакцинных препаратов и их стандартизация 13
Глава 2 Материалы и методы 34
2.1. Материалы 34
2.1.1. Препараты и реагенты 34
2.1.2. Вакцины 35
2.1.3. Штаммы микроорганизмов 37
2.1.4. Оборудование 37
2.1.5. Животные 37
2.2. Методы 37
2.2.1. Определение белка 3 7
2.2.2. Реакция флокуляции (РФ) 37
2.2.3. Реакция агглютинации (РА) 3 7
2.2.4. Реакция непрямой гемагглютинации (РИГА) 38
2.2.5. Реакция иммунодиффузии (РИД) 38
2.2.6. Реакция коагглютинации (РКОА) 38
2.2.7. «Тормозной» вариант РКОА 39
2.2.8. Реакция бактериосорбции иммунных комплексов (РБИК) 39
2.2.9. Аффинная хроматография
2.2.10. Гельхроматография 40
2.2.11. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 40
2.2.12. Иммуноферментный анализ 41
2.2.13. Лиофильное высушивание реагентов з
2.2.14. Биологические методы с использованием животных 43
2.2.15. Статистическая обработка данных 44
ГЛАВА 3. Экспериментальная часть получение антительных компонентов для конструирования тест-систем 45
3.1. Получение гипериммунных кроличьих сывороток 45
3.2. Конструирование антигенных иммуносорбентов, отработка условий выделения аффинноочищенных антител 49
ГЛАВА 4. Разработка тест-набора для определения дифтерийного, столбнячного и коклюшных антигенов в реакции коагглютинации 59
4.1. Отработка технологии получения стафилококкового бактериально-клеточного реагента, содержащего белок А. Отработка методов окрашивания реагента 59
4.2. Конструирование специфических диагностикумов на основе БКР: отработка условий сенсибилизации БКР кроличьими антителами, приготовление окрашенных диагностикумов для определения дифтерийного, столбнячного и коклюшных антигенов 69
4.3. Комплектация тест-набора для определения дифтерийного, столбнячного и коклюшных антигенов в реакции коагглютинации. Изучение стабильности тест-набора при хранении 76
4.4. Валидация тест-набора для определения дифтерийного, столбнячного и коклюшных антигенов в реакции коагглютинации 84
4.5. Изучение возможности применения РКОА в производстве вакцинных препаратов 88
ГЛАВА 5. Конструирование иммуноферментной тест-системы на основе авидин-биотинового взаимодействия для оценки специфической активности субстанции бесклеточной коклюшной вакцины 108
5.1. Разработка технологии получения апмлифицированных конъюгатов на основе коклюшных аффинноочищенных антител кролика 109
5.2. Конструирование иммуноферментной тест-системы для оценки антигенной фракции Bordetella pertussis. Изучение стабильности тест-системы при хранении 111
5.3. Валидация иммуноферментной тест-системы для оценки специфической активности субстанции бесклеточной коклюшной вакцины 125
5.4. Изучение возможности применения иммуноферментной тест системы в производстве бесклеточной коклюшной вакцины 132
Выводы 134
Благодарности 135
Список использованной литературы
