Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 17
1.1. Фотодинамическая терапия 17
1.1.1. Фотодинамическая терапия в онкологии 17
1.1.2. Сущность метода ФДТ 19
1.1.3. Типы фотореакций и механизмы гибели опухолевой клетки 23
1.1.4. Источники света для ФДТ 26
1.1.5. Фотосенсибилизаторы ФС I поколения 30
ФС II поколения. Хлорины 32
ФС III поколения. Липосомальные ФС 40
Борхлорин – борированное производное хлорина е6 42
1.2. Липосомы 44
1.2.1. Свойства липосом 44
1.2.2. 48
1.2.3. Включение лекарственных веществ в липосомы 53
1.2.4. Классификация липосом 55
1.2.5. Методы получения липосом 59
1.2.6. Стерилизация липосом 63
1.2.7. Лиофилизация липосом 65
1.2.8. Контроль качества ЛЛФ 67
Заключение 69
Экспериментальная часть
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 71
2.1. Материалы и реактивы 71
2.2. Оборудование 73
2.3. Методы исследования 74
2.3.1. Методы получения липосом 74
А. Метод получения многослойных липосом борхлорина 74
Б. Методы получения однослойных липосом борхлорина 74 В. Метод получения «пустых» липосом 75
2.3.2. Стерилизация липосом борхлорина 75
2.3.3. Лиофилизация ЛЛФ борхлорина 75
Методика лиофилизации ЛЛФ борхлорина 75
2.3.4. Методы анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина 76
Качественный хроматографический анализ ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина 76
Количественный спектрофотометрический анализ борхлорина в ЛЛФ и
ЛЛФ-лио 76
Валидация методики спектрофотометрического анализа борхлорина 77
Определение эффективности включения борхлорина в липосомы 78
Определение рН липосомальной дисперсии борхлорина 78
Методика определения значения рН ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина 78
Определение диаметра липосом борхлорина 78
Методика определения размера липосом борхлорина 80
Определение формы липосом борхлорина с помощью электронной микроскопии (негативное контрастирование) 80
Методика определения потери в массе при высушивании 80
2.3.5. Статистическая обработка данных 80
Результаты собственных исследований
ГЛАВА 3. Разработка состава и технологии получения ЛЛФ-лио борхлорина 81
3.1. Разработка состава ЛЛФ борхлорина 81
3.2. Разработка технологии получения ЛЛФ-лио борхлорина
3.2.1. Получение липидной пленки 90
3.2.2. Выбор дисперсионной среды для гидратации липидной пленки 92
3.2.3. Получение однослойных липосом борхлорина
Метод экструзии 93
Метод озвучивания 98
Метод гомогенизации 101
3.2.4. Разработка технологии лиофилизации ЛЛФ борхлорина 104
Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлорина 104
Изучение влияния концентрации сахарозы в качестве криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлорина 108
Выбор режима лиофилизации ЛЛФ борхлорина 110
3.2.5. Сравнение технологий получения ЛЛФ-лио борхлорина 114
3.2.6. Технологическая схема получения и состав ЛЛФ-лио борхлорина 116
Заключение 118
ГЛАВА 4. Разработка методик контроля качества ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина 120
4.1. Разработка методики ТСХ для качественного анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лио борхлорина 120
4.1.1. Методика ТСХ-анализа борхлорина и липидных компонентов ЛФ 120
4.1.2. Выбор подвижной фазы для ТСХ-анализа борхлорина и липидных компонентов ЛФ 122
4.1.3. Выбор подвижной фазы для ТСХ-анализа ФХ, входящего в состав ЛФ
борхлорина 125
4.1.4. ТСХ-анализ сахарозы, входящей в состав ЛЛФ-лио борхлорина 129
4.1.5. Оценка пригодности хроматографической системы 131
4.2. Разработка методики спектрофотометрического анализа борхлорина в ЛЛФ и ЛЛФ-лио 137
4.2.1. Изучение спектральных характеристик борхлорина и его идентификация (определение подлинности) в ЛФ 137
4.2.2. Изучение влияния вспомогательных веществ на спектрофотометрическое определение борхлорина в ЛФ (оценка специфичности) 138
4.2.3. Определение максимума поглощения для количественного спектрофотометрического анализа борхлорина в ЛФ 139
4.2.4. Оценка соблюдения закона Бугера-Ламберта-Бера 140
4.2.5. Количественное определение борхлорина в липосомальной дисперсии до и после лиофилизации 140
А. Методика спектрофотометрического определения борхлорина в ЛЛФ 141
Б. Методика спектрофотометрического определения борхлорина в лиофилизате 142
4.2.6. Валидация методики спектрофотометрического анализа борхлорина 143
Специфичность 143
Диапазон применения 143
Линейность 143
Правильность (точность) 146
Прецизионность 147
А. Повторяемость (сходимость) 147
Б. Внутрилабораторная (промежуточная) прецизионность 148
Робастность 149
Заключение 151
Глава 5. Стандартизация и изучение стабильности в процессе хранения ЛЛФ-лио борхлорина 153
5.1. Показатели для стандартизации ЛЛФ-лио борхлорина 153
5.2. Изучение стабильности ЛЛФ-лио борхлорина в процессе хранения 157
Заключение 159
Общее заключение 160
Общие выводы 163
Список литературы
