Введение
1. Обзор литературы 13
1.1. Появление промышленного получения аминокислот методом ферментации 13
1.2. Гипотеза И. Шийо о механизм продукции глутаминовой кислоты глутаматпродуцирующими коринебактериями (ГПКБ) 17
1.3. Таксономическое положение ГПКБ 20
1.4. Природа недостаточности по биотину у ГПКБ .25
1.5. Дефицит биотина в первую очередь нарушает синтез жирных кислот 28
1.6. Роль белка DTSR1 в продукции глутамата 31
1.7. Биосинтез жирных кислот в клетках C. glutamicum 33
1.8. Использование антибиотика церуленина в изучении продукции глутамата 41
1.9. Миколовые кислоты и их возможная роль в индукции продукции глутамата.47
1.10. Слои клеточной стенки C. glutamicum 58
1.11. Внешний слой (S-слой) клеточной стенки C. glutamicum .61
1.12. Межмембранное пространство клеточной стенки C. glutamicum 65
1.13. Механизм действия некоторых антибиотиков, разрушающих барьер проницаемости клеточной стенки бактерий 76
1.14. Роль 2-кетоглутаратдегидрогеназного комплекса в сверхпродукции глутамата у ГПКБ 79
1.15. Роль белка OdhI в продукции глутамата 82
1.16. Фосфорилирование пептида odhI протеинкиназами 83
1.17. Значение фосфорилирования белка OdhI для продукции глутамата 87
1.18. Возможная роль процесса ацетилирования белков в продукции глутамата C. glutamicum 91
1.19. Обнаружение и роль белка, транспортирующего глутаминовую кислоту из клеток ГПКБ 92
1.20. Механочувствительные каналы прокариот 96
1.21. Современное представление о механизме продукции глутамата ГПКБ
1 2. Материалы и методы 109
3. Результаты и обсуждение 121
3.1. Разработка метода пенициллинового обогащения биохимическими мутантами Corynebacterium glutamicum 121
3.2. Пермеабилизация клеток C. glutamicum с помощью антибиотика грамицидина С .129
3.3. Пермеабилизация клеток кишечной палочки на примере метода получения гамма-аминомасляной кислоты 132
3.4. Механизм продукции фенилаланина ауксотрофными по тирозину и аналогорезистеными мутантами C. glutamicum 137
3.4.1. Механизм продукции фенилаланина тирозиновыми ауксотрофами C.glutamicum 140
3.4.2. Механизм продукции фенилаланина мутантами C.glutamicum, устойчивыми к структурным аналогам фенилаланина .145
3.4.3. Возможности дальнейшего повышения продукции фенилаланина .150
3.4.4. Роль плазмидной амплификации гена pheA на продукцию фенилаланина
3.4.5. Мутация в гене pheA C.glutamicum, вызывающая десенсибилизацию префенадегидратазы к ингибированию фенилаланином 154
3.4.6. Деградация фенилаланина клетками C.glutamicum 160
3.5. Изучение путей деградации треонина у Escherichia coli 164
3.5.1. Транспозонное блокирование гена tdh, кодирующего треониндегидрогеназу, и использование полученной мутации в улучшении плазмидных продуцентов треонина 168
3.5.2. Генетическое картирование индуцированной транспозоном Tn5
мутации, блокирующей треониндегидрогеназу у E.coli K-12 .172
3.5.3. Поиск ферментов, участвующих в деградации треонина в клетках E.coli K12 174
3.5.4. Вклад трех путей метаболизации треонина в деградацию треонина клетками E.coli К12 177
3.6. Исследование пути биосинтеза цистеина у Escherichia coli с точки зрения создания продуцентов этой аминокислоты 182
3.6.1. Регуляция активности 3-фосфоглицератдегидрогеназы E.coli 185
3.6.2. Каталитические свойства 3-фосфоглицератдегидрогеназы E.coli 187
3.6.3. Сходные механизмы катализа у других микроорганизмов 194
3.6.4. Десенсибилизация О-серинацетилтрансферазы к ингибированию цистеином для создания продуцента цистеина на основе E .coli .196
3.6.5. Ассимиляция тиосульфата в биосинтезе цистеина клетками E.coli 202
3.6.6. Исследование роли гена ydjN в усвоении S-сульфоцистеина 209
3.6.7. Исследование роли гена ydgR в усвоении О-ацетилсерина 215
Заключение 222
Список литературы
