Введение
Обзор литературы 13
1. Таксономия трибы Proteeae 13
2. Роль Proteus и Morganella в развитии патологических процессов 16
3. Анализ геномов и генов факторов вирулентности P. mirabilis и M. morganii 19
4. Инвазия бактерий в эукариотические клетки 25
5. Роль протеиназ комменсальных и условно-патогенных энтеробактерий в патогенезе 33
6. Внеклеточные металлопротеиназы бактерий 39
7. Внеклеточные металлопротеиназы Proteus 43
8. Внутриклеточные металлопротеиназы энтеробактерий 47
Заключение 52
Экспериментальная часть 54
Материалы и методы 54
1. Используемые штаммы бактерий и клеточные линии 54
2. Питательные среды 54
3. Условия культивирования 55
4. Идентификация микроорганизмов с помощью системы MALDI Biotyper 56
5. Получение культуральной жидкости бактерий и клеточного лизата 56
6. Получение актина 56
7. Определение протеолитической активности 57
8. Зимография 57
9. Выделение внутриклеточной протеиназы M. morganii 58
10. Выделение ДНК 58
11. Полимеразная цепная реакция 59
12. Биоинформационный анализ
13. Гентамициновый метод определения бактериальной инвазии эукариотических клеток 62
14. Определение жизнеспособности клеток HeLa 62
15. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия
16. Влияние культуральной жидкости бактерий на монослой культуры клеток HeLa 64
17. Статистическая обработка результатов исследований 64
Результаты исследований 65
1. Идентификация клинических изолятов 65
2. Эффективность инвазии бактерий P. mirabilis 5127-1 и M. morganii ZM
клеток M HeLa 68
2.1 Влияние бактерий P. mirabilis 5127-1 и M. morganii ZM на жизнеспособность клеток M HeLa в зависимости от инфицирующей дозы 68
2.2 Эффективность инвазии бактерий в зависимости от соотношения бактериальных и эукариотических клеток 69
2.3 Зависимость инвазии энтеробактерий от возраста бактериальной культуры 71
2.4. Влияние культуральной жидкости энтеробактерий на монослой клеток HeLа 72
3. Сравнительная характеристика инвазивной активности энтеробактерий по данным конфокальной микроскопии 74
4. Исследование протеолитической активности штаммов P. mirabilis 5127-1 и M. morganii ZM 78
4.1 Определение внеклеточной и внутриклеточной протеолитической активности штаммов 78
4.2 Особенности биосинтеза внеклеточной протеиназы P. mirabilis 5127 1 81
5. Биоинформационный поиск и анализ генов металлопротеиназ и их гомологов в геномах аннотированных штаммов бактерий семейства Enterobacteriacea e 86
5.1 Поиск генов гомологов внеклеточной металлопротеиназы P. mirabilis 86
5.2 Поиск внутриклеточной металлопротеиназы в геноме аннотированного штамма M. morganii subsp. morganii KT и его ортологов в геномах энтеробактерий 88
5.3 Анализ геномных локусов, содержащих гены исследуемых протеиназ 91
6. Идентификация и анализ гена гипотетической металлопротеиназы в геноме штамма M. morganii ZM 94
7. Выделение внутриклеточной металлопротеиназы M. morganii ZM 98
Обсуждение результатов 101
Заключение 118
Список литературы
