Введение
ГЛАВА I. Обзор литературы 12
1.1. Особо опасные для Российской Федерации фитопатогенные микроорганизмы и современные методы их диагностики 12
1.2. Использование грибов рода Trichoderma для создания биопрепаратов 26
ГЛАВА II. Материалы и методы 38
2.1. Объекты исследования 38
2.2. Измерение концентрации бактериальных клеток на спектрофотометре NanoDrop 2000 39
2.3. Состав питательных сред для культивирования бактерий 40
2.4. Подбор оптимальных условий культивирования A. сitrulli 42
2.5. Искусственное заражение растительного материала бактерией A. citrulli 43
2.6. Применение серологических методов для выявления и идентификации A. citrulli 44
2.6.1. Реакция непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) 44
2.6.2. Иммуноферментный анализ (ИФА) 45
2.7. Применение молекулярных методов для выявления и идентификации A. citrulli 46
2.7.1. Оптимизация методов выделения ДНК из чистой культуры бактерий и зараженного растительного материала 46
2.7.2. Выявление и идентификация возбудителя A. сitrulli методом ПЦР 50
2.7.3. Идентификация A. citrulli методом секвенирование гена 16S рРНК з
2.8. Изучение влияния метаболитов гриба Trichoderma harzianum Rifai F-180 на фитопатогенные бактерии 53
2.9. Определение зон возможного распространения фитопатогенных бактерий на территории Российской Федерации. 55
ГЛАВА III. Выбор особо опасных фитопатогенных бактерий в качестве объектов исследования, определение зон их возможного распространения . 56
ГЛАВА IV. Исследования с фитопатогенной бактерией E. amylovora 68
4.1. Изучение роста E. amylovora на средах разного состава 68
4.2. Изучение влияния культуральной жидкости гриба Tr.harzianum Rifai F-180 на E. amylovora 70
4.3. Изучение влияния гомогенного фермента L-лизин--оксидазы гриба Tr. harzianum Rifai штамм F-180 на E. amylovora 75
ГЛАВА V. Исследования с фитопатогенной бактерией A. citrulli 78
5.1. Подбор питательной среды и оптимальных условий культивирования A. citrulli 78
5.2. Усовершенстование серологических методов выявления и идентификации A. сitrulli 85
5.2.1. Применение реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) для выявления A. сitrulli 85
5.2.2. Применение иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления A. citrulli 88
5.3. Применение молекулярных методов для выявления и идентификации A. citrulli 93
5.3.1. Идентификация полученной бактерии A. сitrulli 93
5.3.2. Оптимизация методов выделения ДНК из чистой культуры A. citrulli и зараженного растительного материала 95
5.3.3. Подбор специфичных праймеров, определение их чувствительности, специфичности и оптимизация условий ПЦР для выявления и идентификации A. citrulli 101
5.4. Изучение влияния метаболитов гриба Tr. harzianum Rifai F-180 на A. citrulli 108
5.4.1. Изучение влияния культуральной жидкости Tr. harzianum Rifai F-180 на A. citrulli.. 108
5.4.2. Изучение влияния гомогенного фермента L-лизин- оксидазы Tr. harzianum Rifai F-180 в отношении A.citrulli 112
Заключение 115
Выводы 124
Библиографический список используемой
Литературы
