Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Общая характеристика микромицетов рода Fusarium 11
1.1.1. Систематическое положение, морфология и распространение микромицетов рода Fusarium 11
1.1.2. Фитопатогенные свойства грибов рода Fusarium 14
1.1.3. Основные токсины, продуцируемые Fusarium 17
1.2. Общие представления о лектинах: определение, свойства, распространение и классификация 21
1.3. Лектины микромицетов: характеристика и классификация 26
1.4. Роль лектинов микромицетов в проблемах поверхностного взаимодействия клеток 30
1.4. Применение лектинов в сельском хозяйстве 38
1.5. Заключение 42
Экспериментальная часть 44
Глава 2. Материалы и методы 44
2.1. Объекты исследования 44
2.2. Состав сред для культивирования микроорганизмов 44
2.3. Выделение микромицетов из природных источников 45
2.4. Морфологическая и молекулярно-генетическая идентификация 45
2.5. Филогенетический анализ нуклеотидных послеловательностей 46
2.6. Определение фитопатогенности микромицетов 48
2.7. Выделение лектинов мицелия грибов 49
2.8. Поготовка эритроцитов к реакции гемагглютинации и их модификация. 50
2.9. Определение активности лектинов микромицетов 50
2.10. Определение специфичности поверхностных лектинов микромицетов к углеводам 51
2.11. Выделение и очистка поверхностного лектина фитопатогенного микромицета F.solani 6 51
2.12. Выделение и очистка поверхностного лектина сапрофитного микромицета F.solani 4 52
2.13. Определение чистоты и молекулярной массы лектинов 54
2.14. Масс-спектрометрическое определение структуры лектинов 55
2.15. Определение температурных рН-значений лектинов 55
2.16. Определение влияния ионов металлов и ЭДТА на активность лектинов 56
2.17. Изучение вличния поверхностного лектина F.solani 6 на устойчивость растений к фузариозу 56
2.18. Изучение влияние поверхностного лектина F.solani 6 на активность пероксидазы гороха 57
2.19. Определение концентрации белка 57
2.20. Статистическая обработка данных 58
Глава 3. Результаты исследований 59
3.1. Определение биоразнообразия грибов рода Fusarium, распространенных на территории Республики Татарстан. Выделение и идентификация изолятов грибов рода Fusarium по комплексу физиолого морфологических признаков 59
3.2. Скрининг грибов рода Fusarium на присутствие лектинов в мицелии изолятов 62
3.3 Выявление взаимосвязи способности микромицетов рода Fusarium к синтезу лектинов и их фитопатогенностью 66
3.3.1. Фитопатогенность микромицетов вида Fusarium solani 66
3.3.2 Сравнительный скрининг микромицетов Fusarium solani на способность к синтезу активных поверхностных лектинов мицелия 72
3.4. Общая характеристика поверхностных лектинов мицелия фитопатогенных и сапрофитных штаммов микромицетов Fusarium solani 75
3.4.1 Активность поверхностных лектинов Fusarium solani в отношении эритроцитов различных групп крови 75
3.4.2 Влияние модификации эритроцитов различными ферментами на гемагглютинирующую активность поверхностных лектинов Fusarium solani 77
3.4.3 Углеводная специфичность поверхностных лектинов Fusarium solani.. 79
3.5. Выделение и очистка поверхностных лектинов мицелия фитопатогенных и сапрофитных микромицетов Fusarium solani 82
3.5.1 Молекулярно-филогенетический анализ штаммов Fusarium solani на основе секвенированной области ITS1-5.8SrDNA-ITS2 рДНК 82
3.5.2 Определение динамики накопления активных лектинов в процессе роста фитопатогенного и сапрофитного штаммов Fusarium solani 86
3.5.3 Выделение и очистка поверхностного лектина фитопатогенного микромицета F.solani 6 88
3.5.4 Выделение и очистка поверхностного лектина сапрофитного микромицета F.solani 4 93
3.6 Определение чистоты и молекулярной массы препарата лектина F.solani 4 и F.solani 6 98
3.7 Определения первичной структуры поверхностных лектинов F.solani 4 и F.solani 6 100
3.8 Изучение физико-химических свойств поверхностных лектинов сапрофита F.solani 4 и фитопатогена F.solani 6 105
3.9 Лектины микромицетов как средство защиты растений 106
3.9.1 Изучение влияние поверхностного лектина F.solani 6 на активность пероксидазы проростков гороха 110
Обсуждение результатов 112
Выводы 125
Список литературы 127
