Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Методы анализа организации эукариотического генома в изучении половых хромосом млекопитающих 10
1.1.1. Сравнительный анализ рутинно- и дифференциально-окрашенных хромосом и хромосомный пэйнтинг 1 1
1.1.2. Сравнительное генетическое картирование и сравнительный анализ первичной нуклеотидной последовательности 13
1.2. Развитие представлений об эволюции половых хромосом 20
1.3. Организация и эволюция половых хромосом млекопитающих 25
1.3.1. Консерватизм генного состава Х-хромосомы 25
1.3.2. Эволюционные страты и последовательность эволюционных изменений Х-хромосомы 30
L3.3. Псевдоаутосомиые районы половых хромосом 33
1.3.4. Избегающие инактивации гены дифференцированных районов Х-хромосомы 37
1.3.5. Особенности дифференцированного района Y-хромосомы 42
1.3.6. Генетический и биологический диморфизм 44
1.3.7. Молекулярные механизмы инактивации Х-хромосомы 46
1.4. Группа обыкновенных полевок рода Microtus 49
Итоги обзора литературы 53
ГЛАВА 2. Материалы и методы 54
2.1. Среды, стоковые растворы, ферменты 54
2.2. Экспериментальные животные 54
2.3. Микробиологические методы работы 55
2.3.1.Приготовление компетентных клеток Е.соН 55
2.3.2.Трапсформация E.coli 55
2.4. Скрининг геномной фаговой библиотеки 56
2.5. Методы выделения ДНК 57
2.5.1.Вьілсл сние плазмидной ДНК... 57
2.5.2.Выделение ДНК фагов 57
2.6. Методы работы с рскомбипянтной ДНК 58
2.6.1.Общие методы клонирования 58
2.6.2.Получсние направленных делений 58
2.7. Саузерн блот-гибридизацня фаговых клонов 59
2.8. Выделение тотальной РИК из органов животных и культур клеток , 60
2.9. Синтез первой цепи кДНК 61
2.10. Полимсразная цепная реакция 61
2.11. Флуоресцентная гибридизация in situ 62
2.12. Определение нуклеотидной последовательности ДНК 64
2.13. Контекстный анализ последовательности ДНК 65
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 66
3.1. Получение зондов избегающих инактивации генов 66
3.2. Флуоресцентная in situ гибридизация фаговых клопов на мстафазных хромосомах пяти видов полевок 73
3.3. Контекстный анализ нуклсотилных последовательностей фаговых клонов 79
3.4. Анализ порядка расположения генов и возможных путей эволюции Х-хромосомы полевок группы arvatis* 85
3.4.1. Реорганизация Х-хромосом пяти видов полевок рода Microtus 89
3.4.2. Сравнительный анализ Х-хромосом полевок и других видов млекопитающих 94
3.4.3. Анализ расположения избегающих инактивации генов на Х-хромосомах полевок 106
Заключение 109
Выводы 114
Список литературы 115
