Введение
Литературный обзор 12
1. Плоские черви Opisthorchiidae. Биология и канцерогенный потенциал Opisthorchis felineus 12
1.1. Жизненный цикл 14
1.2. Эпидемиология 17
1.3. Канцерогенный потенциал O. felineus 21
2. Взаимоотношения «паразит-хозяин». 25
2.1. Метаболизм описторхид, адаптация для жизни в желчных протоках. Питание и источники энергии 25
2.2. Секреторные белки. Воздействие гельминтов на иммунную систему 28
2.3. Потенциальные механизмы развития холангиокарциномы. Специфические оксистеролы 31
3. Система метаболизма ксенобиотиков 36
3.1. Cостав и функции системы метаболизма ксенобиотиков 36
3.2. Фаза 1, ферменты, реакции. Цитохромы Р450 37
3.3. Фаза 2 конъюгации, ферменты, реакции 42
3.4. Фаза экскреции. Ферменты клеточной экскреции 42
4. Система метаболизма ксенобиотиков у гельминтов 45
4.1. Состав системы и функции.
Связь с устойчивостью к лекарственным препаратам 45
4.2. Цитохромы Р450, как молекулярные мишени для разработки антипаразитарных препаратов 49
5. Терапия описторхоза 50
5.1. Празиквантел: механизмы действия, недостатки. Устойчивость к действию празиквантела. Эффективность празиквантела против O. felineus. 50
5.2. Другие антипаразитарные препараты, лекарственная устойчивость 53
6. Поиск новых антигельминтных препаратов 55
6.1. Методы тестирования препаратов. Экспериментальные модели. 55
6.2. Разработка таргетных препаратов. Перенаправление лекарств. 55
7. Заключение 58
Материалы и методы 60
Результаты и обсуждение 75
1. Специфические оксистерольные метаболиты O. felineus и их экскреция в ткани хозяина 75
1.1. Оксистерольные метаболиты в лизатах и в яйцах O. felineus 76
1.2. Состав оксистеролов в лизатах разных видов трематод O. felineus, O. viverrini, Fasciola hepatica 80
1.3. Оксистеролы в крови, желчи, моче зараженных хомяков 82
2. Структура и функциональность системы метаболизма ксенобиотиков Opisthorchis felineus 88
2.1. Цитохромы Р450 88
2.1.1. CYP450 в геномах и транскриптомах плоских червей. CYP450 O. felineus, структура предсказанного белка, экспрессия и регуляция экспрессии мРНК CYP 88
2.1.2. Функциональная значимость цитохрома Р450 для O. felineus 99
2.1.2. Исследование регуляторных областей гена CYP.
Секвенирование белков NR1 семейства ядерных рецепторов. 102
2.1.3. Экспрессия и очистка рекомбинантных цитохромов Р450
O. felineus и C. sinensis в бактериальной системе.
Константы связывания ингибиторов и цитохрома Р450 112
2.2. Ферменты метаболизма фазы 2 конъюгации в геноме O. felineus 121
2.3. Клеточная выделительная система. АВС транспортеры в геноме O. felineus. 124
2.3.1. Р-гликопротеины в геноме O. felineus. Экспрессия Р-гликопротеинов на разных стадиях развития O. felineus 124
2.3.2. Исследования функциональности Р-гликопротеинов O. felineus. Активность и регуляция экспрессии Р-гликопротеинов. Подавление уровня мРНК Р4 с помощью РНК-интерференции. 133
3. Тестирование антигельминтных препаратов 140
3.1. Тестирование празиквантела in vivo и in vitro на Opisthorchis felineus 140
3.2. Тестирование супрамолекулярных комплексов альбендазола с арабиногалактаном на модели экспериментального описторхоза. 153
3.3. Тестирование антигельминтной активности ингибиторов CYP450 156
Обсуждение 162
Выводы 169
Список используемой литературы 171
Перечень сокращений и условных обозначений 189
Перечень иллюстративного материала
