Введение
1. Взаимосвязь структуры иммуноглобулинов g-класса и их протективной активности (обзор литературы) 9
1.1. Структура иммуноглобулинов G-класса 10
1.1.1. Fab фрагмент 11
1.1.2. Fc фрагмент 13
1.1.3. Шарнирный регион 14
1.1.4. Пространственная структура 15
1.1.5. Подклассы IgG человека 18
1.2. Эффекторные функции иммуноглобулинов 20
1.2.1. Активация системы комплемента 21
1.2.2. Индукция опсонизации 21
1.2.3. Лигандсвязывающие участки Fc фрагмента 23
1.3. Механизмы функционирования иммуноглобулинов 28
1.3.1. Модель изменения конформации 29
1.3.2. Аллостерическая модель 35
1.4. Свободные остатки цистеина и их возможное участие в функционировании антител 41
2. Материалы и методы 46
2.1. Материалы 46
2.2. Методы 47
2.2.1. Выделение IgGl 47
2.2.2. Анализ белковых и пептидных фракций 49
2.2.2.1. Определение концентрации белка 49
2.2.2.2. Гель-электрофорез 49
2.2.2.3. Электроблоттинг 50
2.2.2.4. Определение класса и подкласса иммуноглобулинов 50
2.2.2.5. Определение агглютинирующей способности 50
2.2.2.6. Аминокислотный анализ 51
2.2.2.7. Анализ N-концевой аминокислотной последовательности 51
2.2.2.8. Определение N-концевого аминокислотного остатка 52
2.2.3. Методы определения SH-групп и дисульфидных связей 52
2.2.3.1. Предварительная подготовка белка 52
2.2.3.2. Меркаптидирование 52
2.2.3.3. Алкилирование 53
2.2.3.4. Тиол-дисульфидный обмен 56
2.2.4. Получение Fab и Fc фрагментов иммуноглобулина G1 56
2.2.5. Определение С-концевой аминокислотной последовательности алкилированного Fab фрагмента 57
2.2.6. Выделение флуоресцентномеченых пептидов из гидролизата Fab фрагмента IgGl 59
2.2.7. Выделение флуоресцентномеченых пептидов из гидролизата IgGl...60
2.2.8. Определение агглютинирующей способности модифицированного IgGl 62
2.2.9. Определение местоположения легкодоступного остатка цистеина...63
2.2.10. Методы статистической обработки данных 63
3. Результаты и их обсуждение 65
3.1. Получение гомогенного препарата IgGl человека 66
3.2. Определение числа свободных остатков цистеина в IgGl человека 70
3.2.1. Легкодоступные остатки цистеина 71
3.2.2. Маскированные остатки цистеина 71
3.3. Локализация четырех свободных остатков цистеина в IgGl 76
3.3.1. Поиск свободных остатков цистеина в Fab и Fc фрагментах 76
3.3.2. Анализ С-концевой последовательности Fab фрагмента 80
3.3.3. Выделение и анализ флуоресцентных цистеинсодержащих пептидов Fab фрагмента IgGl 85
3.3.4. Выделение и анализ флуоресцентных цистеинсодержащих пептидов IgGl 95
3.4. Определение значимости легкодоступного остатка цистеина для функционирования IgGl 95
3.5. Локализация легкодоступного остатка цистеина в IgG 1 97
Выводы 103
Список литературы 105
Список сокращений 128
Приложение Акты внедрения 129
