Введение
ГЛАВА 1. Полисахариды клеточной стенки 9
1.1. Микрофибриллярные полисахариды 10
1.2. Полисахариды матрикса
1.2.1. Гемицеллюлозы 12
1.2.2. Пектины 17
1.3. Р-Глюканы 19
ГЛАВА 2. Особенности биосинтеза ферментов trichoderma Reesei . 20
2.1. Влияние условий ферментации на эффективность биосинтеза ферментов Т. п reesei
2.2. Получение генетически измененных штаммов Т. reesei 23
ГЛАВА 3. Состав и свойства ферментов, продуциремых Т. Reesei ... 26
3.1. Современные представления о механизме каталитического действия , карбогидраз
3.2. Современные представления о классификации карбогидраз 30
3.3. Структурная организация карбогидраз 31
3.4. Ферментный комплекс Т. reesei
3.4.1. Целлюлазы Т. reesei 33
3.4.2. Гемицеллюлазы Т. reesei 39
ГЛАВА 4. Использование карбогидраз в различных биотехнологических процессах
4.1. Использование ферментов для отбеливания целлюлознобумажной пульпы... 46
4.2. Применение ферментов в текстильной промышленности
4.2.1. Биоотварка хлопчатобумажных тканей 47
4.2.2. Биодепигментация и биополировка хлопчатобумажных изделий 9
4.3. Использование ферментов в качестве кормовых добавок 49
П. Экспериментальная часть 53
ГЛАВА 5. Объекты исследования и методы экспериментов 53
5.1. Использованные вещества 53
5.1.1. Ферментные препараты 53
5.1.2. Субстраты и реактивы 54
5.1.3. Хроматографические носители 56
5.2. Методы 57
5.2.1. Аналитические методы
5.2.2. Выделение и очистка индивидуальных компонентов Т. reesei 57
5.2.3. Определение активностей ферментов 58
5.2.4. Определение рН- и температурного оптимумов действия ферментов... "О
5.2.5. Изучение рН- и термостабильности ферментов 60
5.2.6. Исчерпывающий гидролиз полимерных субстратов под действием ферментов... "1
5.2.7. Ограниченный протеолиз ферментов папаином 61
5.2.8. Определение адсорбционных характеристик ферментов 61
5.2.9. Анализ молекулярно-массового распределения продуктов гидролиза высокомолекулярных субстратов ферментами
5.2.10. Оценка способности ферментов к биоотварке суровой хлопчатобумажной ткани 5.2.11. Оценка способности ферментов к биодепигментации окрашенной индиго /- хлопковой ткани 5.2.12. Оценка способности ферментов к биополировке окрашенной хлопковой ткани 4
5.2.13. Оценка способности ферментов к биоотбеливанию целлюлозной пульпы "5
5.2.14. Вискозиметрический метод определения общей эндодеполимеразной sc активности пектиназ
5.2.15. Оценка "кормовой" ценности ферментов 66
III. Результаты и их обсуждение 68
ГЛАВА 6. Изучение компонентного состава ферментных комплексов на основе мутантных штаммов Т. Reesei . 68
6.1. Разработка экспресс-метода эффективного разделения ферментных ,„ комплексов Т. reesei на компоненты
6.2. Сравнительный анализ компонентного состава препаратов мутантных ,-штаммов Т. reesei
6.2.1. Генеалогия мутантов Т. reesei 72
6.2.2. Сравнение компонентного состава различных ферментных препаратов Т. reesei 73
6.2.3. Количественная оценка содержания ферментов в препаратах Т. reesei 88
6.2.4. Влияние условий ферментации на биосинтез ферментов Т. reesei 88
6.3. Оптимизация препаративного метода выделения целлюлаз и гемицеллюлаз Q1
Т. reesei
ГЛАВА 7. Физико-химические и биохимические свойства выделенных ферментов 99
7.1. Физико-химические и биохимические свойства целлюлаз Т. reesei 99
7.1.1. Биохимические характеристики и субстратная специфичность выделенных gg целлюлаз 7.1.2. рН- и температурные оптимумы активности ферментов, стабильность, і Q2
устойчивость к термошоку 7.1.3. Адсорбционная способность ферментов наМКЦ 109
7.1.4. Ограниченный протеолиз ферментов папаином 110
7.2. Физико-химические и биохимические свойства гемицеллюлаз Т. reesei 112
V
7.2.1. Биохимические характеристики и субстратная специфичность выделенных 119 гемицеллюлаз
7.2.2. рН- и температурные оптимумы активности ферментов, стабильность, 11 /-устойчивость к термошоку
7.2.3. Адсорбционная способность ферментов наМКЦ 122
7.2.4. Исчерпывающий гидролиз ксиланов ферментами 122
7.3. Полигалактуроназа и экзо-р-1,3-глюкозидаза Т. reesei 124
ГЛАВА 8. Выявление ключевых "текстильных" ферментов Т. Reesei 130
8.1. Изучение способности ферментов к биодепигментации джинсовой ткани 130
8.2. Изучение способности ферментов к биоотварке хлопчатобумажной ткани 1 8.2.1. Оптимизация метода оценки способности ферментов к биоотварке і от хлопчатобумажной ткани
8.2.2. Сравнение способности ферментных препаратов к биоотварке 137 хлопчатобумажной ткани
8.2.3. Разработка микрометода оценки способности ферментов к биоотварке і43 хлопчатобумажной ткани
8.2.4. Сравнение способности индивидуальных ферментов к биоотварке і л с хлопчатобумажной ткани и выявление ключевых ферментов 8.3. Изучение способности ферментов к биополировке хлопчатобумажной ткани 147
8.3.1. Разработка миниметода оценки способности ферментов к биополировке 147
8.3.2. Сравнение способности ферментных препаратов к биополировке 153
8.3.3. Сравнение способности индивидуальных ферментов к биополировке и і«
выявление ключевых ферментов
ГЛАВА 9. Выявление ключевых ферментов т. reesei ответственных за биоотбеливание целлюлозной пульпы 157
9.1. Сравнение способности ферментных препаратов к биоотбеливанию - -7 целлюлозной пульпы 9.2. Сравнение способности индивидуальных ферментов к биоотбеливанию - целлюлозной пульпы и выявление ключевых ферментов
ГЛАВА 10. Сравнительный анализ способности ферментов к увеличению питательной ценности кормов животных и птиц... 164
10.1. Разработка in vitro тестов оценки способности ферментов к увеличению м
питательной ценности кормов
10.1.1. Тест на основе анализа образования восстанавливающих Сахаров в ходе гидролиза природных кормов
10.1.2. Применение вискозиметрического метода при изучении падения вязкости экстракта ржи под действием ферментов
10.2. In vitro "кормовые" испытания препаратов и индивидуальных ферментов на fi7
различных типах кормов
10.2.1. Результаты теста с использованием анализа ВС 167
10.2.2. Исследование изменения вязкости экстракта ржи под действием ферментных j 73 препаратов и индивидуальных ферментов
10.3. Влияние растительных ингибиторов на ксиланазы Т. reesei 182
Выводы 186
Список литературы
