Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Виды гепатитов 13
1.2. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантные системы защиты 15
1.2.1. Свободные радикалы и пути их образования 15
1.2.2. Пероксидное окисление липидов и его роль 16
1.2.3. Участие свободнорадикальных процессов в жизнедеятельности 19
1.2.4. Активные формы кислорода, механизм их образования и роль 20
1.2.5. Роль свободнорадикального окисления в развитии патологии печени 25
1.2.6. Понятие об антиоксидантной. системе защиты 25
1.2.6.1. Ферментативные антиоксиданты 26
1.2.6.2. Неферментативная антиоксидантная система 29
1.2.6.3. Белки теплового шока 31
1.3. Механизм токсического действия четыреххлористого углерода 32
1.4. Характеристика глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из различных организмов 35
1.4.1. Реакция, катализируемая ферментом 35
1.4.2.Физиологическая роль глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 35
1.4.3. Изоформы и внутриклеточная локализация глюкозо-6- фосфатдегидрогеназы 37
1.4.4. Очистка глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из различных источников 39
1.4.5. Молекулярная масса и субъединичная структура 41
1.4.6. Идентификация функциональных групп активного центра глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 42
1.4.7. Влияние рН среды и температуры на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 45
1.4.8. Кинетическое поведение и регуляция активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 47
1.4.8.1. Сродство к субстрату и кофакторам 47
1.4.8.2. Регуляция активности фермента 50
1.4.8.2.1. Активаторы глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 50
1.4.8.2.2. Ингибиторы активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 52
1.4.8.2.3. Особенности функционирования глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы при различных патологических состояниях 58
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования
2.1. Объект исследования 60
2.2. Создание модели экспериментального токсического гепатита 60
2.3. Получение субклеточных фракций гепатоцитов 60
2.4. Определение интенсивности процессов СРО методом биохемилюминесценции 61
2.5. Определение содержания малонового диальдегида 63
2.6. Определение содержания диеновых конъюгатов 64
2.7. Определение активности ферментов 65
2.8. Определение количества белка 66
2.9. Выделение и очистка фермента 66
2.9.1. Экстракция 67
2.9.2. Фракционирование белков с помощью сульфата аммония 67
2.9.3. Гель-фильтрация 68
2.9.4. Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе 69
2.10. Исследование кинетических характеристик и регуляции активности фермента 69
2.11. Аналитический электрофорез 70
2.12. Определение молекулярной массы 71
2.13. Статистическая обработка экспериментальных данных 71
ГЛАВА 3. Оценка интенсивности свободнорадикальных процессов и активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в динамике развития экспериментального токсического гепатита
3.1. Параметры биохемилюминесценции в печени крыс в динамике развития токсического гепатита 73
3.2. Определение содержания первичных и вторичных продуктов пероксидного окисления липидов 75
3.3. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в динамике развития токсического гепатита 80
ГЛАВА 4. Кинетические и регуляторные свойства глюкозо-6-фосфатдегидрогсназы из печени крыс в норме и при экспериментальном токсическом гепатите
4.1. Исследование субклеточной локализации глюкозо-6- фосфатдегидрогеназы 84
4.2. Очистка глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из печени контрольных и подвергнутых токсическому гепатиту крыс 86
4.3. Исследование кинетических параметров каталитического действия глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и при экспериментальном токсическом гепатите 91
4.4. Молекулярная масса глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 95
4.5. Влияние концентрации ионов водорода на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и при экспериментальном токсическом гепатите 97
4.6. Регуляторные свойства глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы из печени крыс в норме и при патологии 101
4.6.1. Участие ионов некоторых металлов регуляции активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 101
4.6.1.1. Роль ионов Mg2+ и Мп2+ в регуляции активности глюкозо-6 фосфатдегидрогеназы в норме и при токсическом гепатите 101
4.6.1.2. Влияние ионов Fe2+, Cu2+, Са2+ на активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 102
4.6.2. Влияние пероксида водорода на функционирование глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в норме и при патологии 109
4.6.3. Участие глутатиона в регуляции активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в норме и при токсическом гепатите 112
4.6.4. Регуляция активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы адениннуклеотидами и НАДФН 117
4.6.5. Особенности регуляции активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы под действием интермедиатов цикла Кребса при экспериментальном токсическом гепатите 124
4.6.6. Участие интермедиатов углеводного обмена в регуляции активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы 129
Заключение 133
Выводы 139
Литература 141
Приложение 167
