Введение
ГЛАВА 1. КСИЛАНЫ И КСИЛАНОЛИТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ФЕРМЕНТОВ 9
1.1. Структура и распространение ксиланов 10
1.2. Ферменты, участвующие в конверсии ксиланов 13
ГЛАВА 2. Эндо-1,4-р-КСИЛАНАЗЫ 16
2.1. Классификация, особенности молекулярного строения и механизм действия ксиланаз
2.2. Свойства ксиланаз из различных источников 28
2.3. Белковые ингибиторы ксиланаз в злаках 30
ГЛАВА 3. ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КСИЛАНАЗ 37
3.1. Ксиланазы в целлюлозно-бумажной промышленности 37
3.2. Использование ксиланаз в качестве компонента кормовых добавок 38
3.4. Другие перспективные направления применения ксиланаз 40
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 41
ГЛАВА 4. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ 41
4.1. Используемые ферменты и препараты 41
4.2. Субстраты и реактивы 41
4.3. Методы выделения ксиланаз С. lucknowense 43
4.4. Хроматографический анализ ферментных препаратов 44
4.5. Определение ферментативной активности, концентрации ВС и белка 45
4.6. Вискозиметрический метод определения общей эндодеполимеразной
46 активности ксиланаз
4.7. Определение рН- и температурного оптимумов действия ферментов 47
4.8. Изучение термостабильности ксиланаз 48
4.9. Исследование адсорбции ферментов на МКЦ 48
4.10. Исчерпывающий гидролиз полимерных субстратов под действием ферментов
4.11. Анализ молекулярно-массового распределения (ММР) продуктов гидролиза арабиноксилана
4.12. Анализ низкомолекулярных продуктов гидролиза ксиланов 49
4.13. Трипсинолиз белков и подготовка проб для масс-спектрометрии 50
4.14. Масс-спектрометрический анализ Сахаров и трипсиновых гидролизатов белков
4.15. Метод оценки влияния белковых ингибиторов ржи на активность ксиланаз
4.16. Оценка способности ферментов снижать вязкость экстрактов ржаной
муки (in vitro тест, имитирующий работу фермента в качестве кормовой добавки)
4.17. Оценка способности ферментов к биоотбеливанию небеленой целлюлозы 53
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 54
ГЛАВА 5. ВЫДЕЛЕНИЕ И СВОЙСТВА КСИЛАНАЗ С. LUCKNOWENSE 54
5.1. Компонентный состав и общая характеристика ферментного комплекса С. lucknowense
5.2. Выделение ксиланаз и их биохимические характеристики 58
5.3. Свойства гомогенных ксиланаз С. lucknowense 70
5.3.1. Специфичность ксиланаз и механизм их действия на полимерные
субстраты
5.3.2. Физико-химические свойства ксиланаз С. lucknowense 80
ГЛАВА 6. КЛАССИФИКАЦИЯ И МОЛЕКУЛЯРНОЕ СТРОЕНИЕ КСИЛАНАЗ 86
6.1. Масс-спектрометрический анализ выделенных белков и аминокислотные последовательности их пептидов
6.2. Аминокислотные последовательности и строение ХупЮА и ХупЮВ -гликозид-гидролаз 10-й семьи
6.3. Аминокислотные последовательности и строение Xynl 1А и Xynl 1С -гликозид-гидролаз 11-й семьи
109
ГЛАВА 7. КОМПОНЕНТНЫЙ СОСТАВ И СВОЙСТВА ПРЕПАРАТОВ С КЛОНИРОВАННЫМИ КСИЛАНАЗАМИ С. LUCKNOWENSE
7.1. Общая характеристика и свойства препаратов на основе штаммов гриба с мультикопированными генами ксиланаз
7.2. Анализ компонентного состава ферментных препаратов с увеличенным содержанием ХупЮА, Xynl 1А и ХупЮВ
3
ГЛАВА 8. ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ КСИЛАНАЗ С. LUCKNOWENSE В КАЧЕСТВЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ И В ЦЕЛЛЮЛОЗНО-БУМАЖНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ 120
8.1. Влияние белковых ингибиторов злаков на активность выделенных ксиланаз
8.2. Оценка эффективности действия индивидуальных ксиланаз и ксиланазных 123 препаратов при их использовании в качестве добавки к кормам на основе ржи
8.3. Сравнение способности индивидуальных ксиланаз и препаратов С. lucknowense к биоотбеливанию небеленой целлюлозы
ВЫВОДЫ 134
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 136
