Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Опухолевые стволовые клетки, их свойства и роль в опухолевой прогрессии 9
1.1.1. Свойства и основанные на них методы выявления ОСК 9
1.2. ОСК и микроокружение 17
1.3. Способы элиминации ОСК 19
1.4. Механизмы, приводящие к приобретению и поддержанию свойств ОСК... 23
1.4.1. Эпителиально-мезенхимальный переход 24
ГЛАВА 2. Материалы и методы 36
2.1. Бактериальные штаммы и плазмиды 36
2.2. Эукариотические клеточные линии 36
2.3. Инфекция опухолевых клеток 36
2.4. Анализ экспрессии генов 37
2.5. Вестерн-блот гибридизация 38
2.6. Иммунофлуоресцентный анализ 40
2.7. Клеточные эксперименты in vitro 41
2.8. Цитофлуориметрический анализ 41
2.9. Определение уровня активности TCF/LEF 2.10. Определение уровня активности каспаз 42
2.11. Эксперименты на бестимусных мышах 43
2.12. Иммуногистохимический анализ препаратов тканей опухолей 44
2.13. Статистическая обработка 45
ГЛАВА 3. Результаты исследования 46
3.1. Влияние изменения экспрессии Е-кадгерина на формирование фенотипа ОСК 46
3.1.1. Получение клеточных сублиний с различным уровнем экспрессии Е-кадгерина 46
3.1.2. Определение минимальной прививочной дозы клеток А549 и НСТ116, исследование скорости роста in vivo и in vitro 51
3.1.3. Влияние изменения уровня Е-кадгерина в линии А549 на метастазирования опухолей 55
3.1.4. Влияние изменений экспрессии Е-кадгерина на долю ОСК в клеточных линиях А549 и НСТ116 56
3.1.5. Влияние изменения уровня Е-кадгерина в линиях НСТ116 и А549 на активацию Wnt/-катенин сигнального каскада и профиль экспрессии маркеров стволовых клеток 58
3.2. Влияние подавления экспрессии Notch1 на формирование фенотипа ОСК 61
3.2.1. Получение клеточных сублиний А549 и НСТ116 с подавленной экспрессией Notch1 61
3.2.2. Влияние подавления экспрессии Notch1 на ЭМП 62
3.2.3. Определение минимальной прививочной дозы клеток А549 и НСТ116, исследование скорости роста in vivo и in vitro 64
3.2.4. Влияние подавления экспрессии Notch1 на долю ОСК в клеточных линиях А549 и НСТ116 и на профиль экспрессии маркеров стволовых клеток 67
3.3. Влияние подавления экспрессии рецепторов VEGFR-2 и VEGFR-3 на формирование фенотипа ОСК 71
3.3.1. Получение клеточных сублиний с подавленной экспрессией рецепторов VEGFR-2 и VEGFR-3 71
3.3.2. Выявление причины гибели опухолевых клеток при подавлении экспрессии рецепторов VEGFR-2 и VEGFR-3 73
ГЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов 75
4.1. Роль экспрессии Е-кадгерина в формировании фенотипа ОСК 75
4.2. Роль экспрессии Notch1 в формировании фенотипа ОСК 78
4.3. Роль экспрессии рецепторов VEGFR-2 и VEGFR-3 в формировании фенотипа ОСК 80
Заключение 82
Выводы 83
Список сокращений 84
Список литературы 86
