Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Фотодинамическая терапия 7
1.1.1. Фотохимические основы ФДТ 8
1.1.1.1, Воздействие синглетного кислорода (фотодинамический эффект II типа) 11
1.1.1.2. Фотоокисление с участием радикальных частиц и переноса электрона (фотодинамический эффект 1 типа) 13
1.1.2. Фотосенсибилизаторы, применяемые в фотодинамической терапии рака 15
1.1.2.1, Сенсибилизаторы первого поколения на основе порфиринов 15
1.1.2.2. Сенсибилизаторы второго поколения 17
1.1.3. Транспорт и распределение фотосенсибилизаторов в организме 25
1.1.3.1. Распределение фотосенсибилизаторов в организме 25
1.1.4. Патофизиологические процессы, вызывающие некроз клеток 30
1.1.4.1. Реакции, сенсибилизируемые в клетке 30
1.1.4.2. Острая воспалительная реакция (ранняя фаза) 31
1.1.4.3. Отложенная воспалительная реакция (поздняя фаза) 34
1.1.5. Недостатки, ограничения и пути совершенствования методов фотодинамической терапии 36
1.2. Сенсибилизированная фотомодификация ДНК бинарными системами олигонуклеотидных реагентов 39
1.2.1. Синглет-синглетный перенос энергии 41
1.2.2. Двухквантовое резонансное триплет-триплетное возбуждение 43
1.2.3. Перспективы использования фотореагентов для направленной модификации нуклеиновых кислот in vivo 45
2. Материалы и методы 47
2.1. Материалы 47
2.2. Олигонуклеотиды 47
2.3. Методы 48
2.3.1. Получение фотоактивируемых реакционноспособных производных олигонуклеотидов 48
2.3.2. Синтез производных олигонуклеотидов, несущих остаток сенсибилизатора 49
2.3.3. Выделение олигонуклеотидных производных методом ВЭЖХ 50
2.3.4. Гашение флуоресценции периленильных производных 50
2.3.5. Введение радиоактивной метки в олигонуклеотиды 51
2.3.6. Фотомодификация нуклеиновых кислот, 51
2.3.7. Электрофоретический анализ продуктов модификации, радиоавтография и денситометрия 52
2.3.8. Определение степени и позиционной направленности модификации ДНК-мишени 52
2.3.9. Культивирование клеток. 53
2.3.10. Модификация клеточных белков фотоактивируемым производным олигонуклеотида 53
2.3.11. Электрофоретический анализ белков. 54
3. Результаты и обсуждение 55
3.1. Влияние нуклеотидной последовательности ДНК-мишени на эффективность сенсибилизированной фотомодификации 55
3.1.1. Сенсибилизированная фотомодификация ДНК-мишеней Ml и М2 56
3.1.2. Сенсибилизированная фотомодификация ДНК-мишени МЗ 60
3.2. Влияние строения сенсибилизатора на скорость и эффективность сенсибилизированной фотомодификации ДНК 65
3.2.1. Влияние заместителей в антраценовом остатке 66
3.2.1.1. Строение и спектрально-люминесцентные свойства сенсибилизаторов на основе антрацена 66
3.2.1.2. Сенсибилизированная фотомодификация ДНК-мишени 67
3.3. Использование перилена в качестве сенсибилизатора 71
3.3.1. Спектрально-люминесцентные свойства перилена 71
3.3.2. Гашение флуоресценции олигонуклеотидного производного перилена в двуцепочечных комплексах 72
3.3.3. Сенсибилизированная фотомодификация ДНК-мишени 75
3.3.4. Механизм сенсибилизации фотореагента основан на переносе электрона 78
3.4. Сенсибилизированная фотомодификация олигонуклеотид-связывающих белков, представленных на поверхности эукариотических клеток 85
Выводы 94
