Введение
3. Обзор литературы: Флавоноиды красного винограда: нахождение в природных источниках сырья, биологические свойства, анализ, выделение, очистка 10
3.1. Структура флавоноидов 11
3.2. Полифенолы, содержащиеся в ягоде винограда 11
3.2.1. Фенолокислоты 11
3.2.2. Флавонолы 12
3.2.3. Антоцианы 13
3.2.4. Катехины, лейкоантоцианидины, проантоцианидины 14
3.3. Содержание фенольных соединений в винограде 16
3.3.1. Содержание катехинов и танинов 17
3.3.2. Содержание лейкоантоцианинов 19
3.3.3. Содержание антоцианов 19
3.3.4. Содержание флавонолов 20
3.4. Окислительный стресс. 20
3.4.1. Классификация АФК 20
3.4.2. Функции радикалов кислорода 22
3.4.2.1. Супероксид 22
3.4.2.2. Окись азота 24
3.4.2.3. Действие радикала коэнзим Q 25
3.4.3. Методы изучения свободных радикалов 25
3.4.3.1. Биохимические методы 25
3.4.3.2. Биофизические методы 26
3.4.4. ПОЛ 27
3.4.5. Биологические последствия ПОЛ 28
3.5. Свойства полифенолов красного винограда, определяющие их 29
перспективность для косметики 29
3.5.1. Ингибирование СРО полифенолами красного винограда 29
3.5.2. Определение антиоксидантной активности отдельных компонентов экстракта винограда. Индекс активности антиоксиданта 34
3.5.3. Антиоксидантные свойства полифенолов винограда in vivo 36
3.5.4. Зависимость антиоксидантной активности от структуры полифенолов 37
3.5.5. Зависимость антирадикальной активности от структуры полифенолов 40
3.5.5.1. Использование метода QSAR при анализе антирадиальной активности
флавоноидов 41
3.5.6. Влияние олигомерного проантоцианидина на волокна коллагена 44
3.5.7. Влияние олигомерного проантоцианидина на коллаген и эластин 44
3.5.8. Солнцезащитное действие 45
3.5.9. Противовоспалительное действие 46
3.5.10. Р - Витаминная активность 46
3.5.11. Антимикробные свойства 47
3.5.12. Противопухолевая активность 48
3.5.13. Антимутагенная активность...! 48
3.6. Методы выделения и очистки полифенолов винограда 49
3.6.1. Предварительная очистка субстрата 49
3.6.2. Экстракция 49
3.6.3. Хроматографическая очистка 50
3.6.4. Разделение в двухфазных системах 51
3.7. Стабильность антоцианов 51
3.7.1. Термическая устойчивость антоцианов 51
3.7.2. рН-устойчивость полифенолов 52
3.8. Определение полифенолов винограда 52
3.8.1 Определение суммы полифенолов 52
3.8.2. Определение антоцианов 53
3.8.3. Определение катехинов 53
3.8.4. Определение флавонолов 53
3.8.5. Определение лейкоантоцианидинов 54
3.8.6. Методы качественного определения полифенолов винограда 54
3.9. Применение флавоноидов в косметике 58
3.9.1. Синергизм антиоксидантов 58
4. Обсуждение результатов 60
4.1. Определение полифенолов 61
4.2. Идентификация веществ 63
4.2.1. Определение полифенолов 65
4.3. Технология получения антоцианов из виноградного жмыха 66
4.3.1. Подготовка сырья 66
3.3.1. Подбор экстрагента 66
4.3.1. Поиск оптимального температурного режима 70
4.3.4. Характеристика "Комплекса биофлавоноидов красного винограда" ...71
4.3.5. Дробная экстракция виноградного жмыха 73
4.3.6. Очистка антоцианов с помощью сорбции на тальке 74
4.3.7. Выделение танинов красного винограда 75
4.3.8. Колоночная хроматография полифенолов на силикагеле 75
4.3.9. Осаждение кофейного эфира М-З-г 77
4.3.10. Технологическая схема выделения флавоноидов 77
4.4. Свойства полифенолов винограда 79
4.4.1. Определение антиоксидантной активности регистрацией МА 79
4.4.2. Определение антирадикальной активности по скорости восстановления ДФПГ ; 80
4.4.3. Связь структуры и антирадикальной активности 82
4.4.4. Определение гидрофобности флавоноидов 87
4.4.5. Способность к ингибированию Sacharomyces cerevisiae 88
4.4.6. Защита кожи от УФ-излучения 90
4.4.7. Влияние экстракта красного винограда на набухание эпидермиса 91
4.4.8. Влияние экстракта красного винограда на спонтанную сократительную
активность кровеносных сосудов кожи и связь ее с антиоксидантной активностью 92
4.4.9. Устойчивость антоцианов к окислению в косметических композициях 95
4.4.10. Устойчивость флавоноидов красного винограда при различных рН 96
5. Экспериментальная часть 99
5.1. Материалы и методы 100
5.2. Выделение полифенолов винограда ....101
5.2.1. Подготовка сырья 101
5.2.2. Экстракция 101
5.2.2.1. Подбор растворителя 101
5.2.2.2. Определение оптимального температурного режима экстракции 101
5.2.2.3. Дробная экстракция 101
5.3. Применение хроматографических методов 101
5.3.1. Очистка антоцианов с помощью флэш-хроматографии на тальке ; 101
5.3.2. Сорбция антоцианов на тальке 102
5.3.3. Хроматография антоцианов на силикагеле 102
5.3.4. Определение растворимости антоцианов в хроматографических системах... 102
5.3.5. Разделение антоцианов красного винограда. Разделение антоцианов красного винограда 103
5 5.3.6.Выделение 3,4-дигидроксифенил 3,4-дигидро-2Н-хромен-3,5,7-триола. 103
5.3.7. Выделение 3,5,7,3,4-пентагидроксифлавона 104
5.3.8. Выделение 4,,3,5,7-тетрагидрокси-3,5-диметоксифлавилиум хлорида 104
5.4. Очистка веществ осаждением 104
5.4.1. Осаждение 3-0-Р-В-глюкозилокси-(6-0-(3,4-дигидроксициннамоил))-4,5,7-
тригидрокси-3,5-диметоксифлавилиум хлорида 104
5.4.2. Получение 1,3,7-триметилксантана 105
5.5. Определение антоцианов методом ТСХ в сочетании с оптической денситометриеи 105
5.6. Определение редуцирующих веществ по Бренстеду 106
5.7. Определение нелетучих веществ 109
5.8. Определение термической устойчивости антоцианов в кремах 109
5.9. Определение коэффициента распределения флавоноидов в системе октанол-вода 109
5.10. Изучение свойств полученных веществ 109
5.10.1. Определение ПОЛ 109
5.10.2. Определение антирадикальной активности по отношению к ДФПГ 110
5.10.3. Способность антоцианов к ингибированию Sacharomyces cerevisiae ПО
5.10.4. Определение солнцезащитных свойств фракции антоцианов 111
5.10.5. Исследование явлений резонанса кожи при увлажнении и набухании
эпидермиса 111
5.10.6. Исследование вазомоторной активности кожи 112
5.11. Статистическая обработка результатов 112
6. Выводы 115
7. Благодарности 117
8. Список литературы 118
