Введение
1. Термостабильная лихеназа clostridium thermocellum как представитель бактериальных гликозилгидролаз: свойства и структура 9
2. Гликозилгидролазы в фундаментальных и прикладных исследованиях 14
2.1. Современные направления белковой инженерии: рациональный дизайн и направленная эволюция ферментов и белков 14
2.2. Изучение молекулярных основ термостабильности и фолдинга белков с использованием ферментов термофильных организмов 18
2.3. Термостабильные гликозилгидролазы в прикладных исследованиях 27
3. Репортерные системы и возможности их применения для изучения различных аспектов регуляции экспрессии генов 31
3.1. Основа методологии репортерных систем 32
3.2. В каких исследованиях используют репортерные системы 33
3.2.1. Изучение активности и индуцибельности промоторов и регуляторных элементов (транскрипционныерепортеры) 34
3.2.2. Поиск новых промоторов и регуляторных элементов 35
3.2.3. Определение локализации продуктов исследуемых генов (трансляционные репортеры) 35
3.2.4. Система доставки генов или продуктов генов к клеткам-мишеням. Генотерапия 36
3.3. Основные репортерные системы: преимущества и недостатки 37
3.3.1. р-глюкуронидаза (GUS) E.coli 39
3.3.2. Зеленый флуоресцентный белок (GFP) Aequoria victoria 40
3.3.2.1. GFP-подобные белки 43
3.3.3. Термостабильная лихеназа (LicB) С. thermocellum 43
4. Материалы и методы исследований 48
5. Результаты и обсуждения 67
5.1. Термостабильная лихеназа как транскрипционный репортер в оригинальной дрожжевой векторной системе для изучения регуляторных функций некодирующнх последовательностей геномов эукариот 67
5.2. Термостабильная лихеназа как трансляционный репортер 75
5.2.1. Лихеназа как трансляционный репортер для RecA белка Е. со И. 76
5.2.2. Лихеназа как трансляционный репортер для белка СгуЗА B.thuringiensis 79
5.3. Термостабильная лихеназа как репортерный белок-носитель для случайных и антигенных пептидов 83
Заключение 115
Выводы 117
