Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1 Диарейные токсины моллюсков 13
1.1.1 Диарейные токсины моллюсков в системе классификации фикотоксинов 13
1.1.2 Общая характеристика токсинов группы окадаевой кислоты 14
1.1.3 Биологическая роль диарейных токсинов моллюсков 16
1.2 Продуценты токсинов 19
1.2.1 Характеристика видов рода Dinoph ysis как продуцентов токсинов 19
1.2.2 Характеристика видов рода Prorocentrum как продуцентов токсинов 22
1.3 Передача и трансформация ДТМ в экологических сетях 27
1.3.1 Передача токсинов группы ОК в пищевой цепи 27
1.3.2 Трансформация токсинов в процессе передачи по пищевой цепи 30
1.4 Методы качественной и количественной оценки ДТМ 32
1.4.1 Биологическое тестирование 33
1.4.2 Конкурентный иммуноферментный анализ 34
1.4.3 Ингибирование серин/треониновых фосфатаз 35
1.4.4. Высокоэффективная жидкостная хроматография ДТМ 36
1.5 Контроль и регулирование ДТМ в пищевых продуктах 41
1.5.1 Случаи отравления людей ДТМ 41
1.5.2 Нормы регулирования и мониторинга ДТМ в пищевых продуктах 43
Глава 2. Экспериментальная часть 45
2.1 Краткая характеристика района работ 45
2.2 Материалы 47
2.2.1 Реактивы 47
2.2.2 Отбор особей мидии Грея C. grayanus 48
2.2.3 Извлечение мягких тканей мидии Грея C. grayanus 48
2.2.4 Отбор проб фитопланктона и подсчет клеток Dinophysis spp. 48
2.2.5 Подготовка проб фитопланктона для анализа внутриклеточного содержания ДТМ из клеток Dinophysis spp... 49
2.2.6 Получение культуры Prorocen trum spp. 50
2.3 Методы 51
2.3.1 Подсчет клеток микроводорослей 51
2.3.2 Иммуноферментный анализ ДТМ 51
2.3.3 Высокоэффективная жидкостная хроматография с флуоресцентной детекцией 53
2.3.4 Высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрической детекцией 58
Глава 3. Результаты исследований 61
3.1 Динамика численности D. acuminata и содержание ДТМ в клетках D. acuminata и P. foraminosum... 61
3.1.1 Динамика численности Dinophysis spp. в Амурском заливе Японского моря
3.1.2 ДТМ в образцах Dinophysis spp. 64
3.1.3 ДМТ в культуре клеткой P. foraminosum 65
3.2 ДТМ в тканях мидии С.grayanus 67
3.2.1 Распределение ДТМ в теле мидии C. grayanus 67
3.2.2 Сезонная динамика концентрации ДТМ в тканях C. grayanus в период 2011-2013 69
3.2.3 Качественный состав ДТМ в пищеварительной железе мидии по данным ВЭЖХ-ФД 74
3.2.4 Распределение мидий с ДТМ на прибрежных акваториях залива Петра Великого 76
3.3 Оптимизация метода анализа ДТМ в форме флуоресцентных производных 4 бромометил-7-метоксикумарина 78
3.3.1 Оптимизация экстракции токсинов 78
3.3.2 Условия проведения анализа смеси ММК-производных аналогов окадаевой кислоты 80
3.3.3 Калибровка колонки при помощи смеси стандартов 83
Глава 4. Обсуждение результатов 84
4.1 D. acuminata и P. foraminosum как векторы переноса ДТМ 84
4.2 Распределение ДТМ в органах моллюска C.grayanus 86
4.3 Сезонная динамика и распределение ДТМ на акватории залива Петра Великого Японского моря 88
4.4 Оптимизация методов анализа токсинов группы ОК в тканях моллюсков и в клетках морских динофлагеллят 90
Заключение 94
Выводы 97
Список литературы 98
