Введение
Обзор литературы... 10
Точки разрывов при хромосомных перестройках 10
Хромосомные перестройки и ассоциированные с ними заболевания 10
Группы химерных белков 12
Кластеры точек разрыва 15
Механизм рекомбинации 18
Структура белка и кажущаяся кластеризация точек разрыва 20
Роль ядерной архитектуры в образовании хромосомных перестроек 25
Структура и механизм действия топоизомераз II типа 29
Основные свойства топоизомераз II 30
Структура белка 31
Механизм действия 34
Клеточная роль топоизомеразы II 36
Репликация 36
Транскрипция 38
Конденсация хромосом 39
Рекомбинация 40
Ингибирование топоизмеразы II 41
Постановка задачи и методические подходы 52
Материалы и методы 55
Приготовление и трансформация компетентных клеток Е. coli 55
Трансформация бактериальных клеток 55
Манипуляции с плазмидной ДНК 56
Полимеразная цепная реакция 56
Выделениебакмидной ДНК из бактерий 56
Положительная селекция клонов, содержащих KIL 57
Декатенация плазмид 58
Индукция незаконной рекомбинации in vitro 59
Трансфекция 59
Выделение плазмидной ДНК из эукариотических клеток 60
Радиоактивное мечение олигонуклеотидов и гибридизация их с ДНК 61
Обработка ядер микрококковой нуклеазой и Саузерн-гибридизация 63
Конструирование плазмид 64
Результаты исследования и их обсуждение 67
Создание модельной системы для количественной оценки частоты незаконной
рекомбинации 67
Проверка функционирования гена KIL 71
Декатенирование модельных конструктов 72.
Количественная оценка частоты незаконной рекомбинации 73
Индукция незаконной рекомбинации in vitro 75
Эксперименты in vivo 76
Эписомная репликация модельных плазмид в эукариотических клетках 76
Индукция незаконной рекомбинации in vivo и влияние ингибиторов 78
Предположительная модель действия топоизомеразы II 80
Картирование участков разрыва в рекомбинантных плазмидах 81
Нуклеосомный статус трансфецированных модельных плазмид 84
Выводы 87
Список литературы. 88
Благодарности... 109
