Введение
2. Обзор литературы 14
2.1. Нефрон, образующие его клетки и их маркёры 14
2.1.1. Эндотелиальные клетки клубочка 15
2.1.2. Подоциты 16
2.1.3. Мезангиальные клетки 17
2.1.4. Канальцевый эпителий 18
2.2. Репаративная регенерация 19
2.2.1. Клеточная пролиферация и методы её изучения 19
2.3. Репаративная регенерация почки 21
2.4. Участие неповреждённых клеток почки в репарации нефрона при остром повреждении 22
2.4.1. Регенерация клубочка при остром гломерулонефрите 22
2.4.1.1. Острый гломерулонефрит 23
2.4.1.2. Репаративный ответ клеток клубочка на модели острого гломерулонефрита 23
2.4.2. Регенерация эпителия канальцев при остром повреждении 25
2.4.2.1. Острая почечная недостаточность 25
2.4.2.2. Регенеративный ответ на модели острой почечной недостаточности 26
2.5. Участие неповреждённых клеток почки в репарации нефрона при хроническом повреждении 28
2.5.1. Хронический гломерулонефрит 28
2.5.2. Хроническое повреждение клубочка 31
2.5.2.1. Изменения эндотелиальных клеток 32
2.5.2.2. Изменения мезангиальных клеток 32
2.5.3. Хроническое повреждение эпителия канальцев 33
2.5.3.1. Причины повреждения канальцев 33
2.6. Резидентные стволовые клетки и их участие в регенераторном процессе 35
2.6.1. Свойства резидентных стволовых клеток 35
2.6.2. Резидентная стволовая клетка почки 36
2.6.2.1. Локализация, выделение и участие в регенерации резидентных стволовых клеток почки 37
2.7. Стволовые клетки костного мозга и их участие в регенерации почки 41
2.7.1. Гемопоэтическая стволовая клетка 42
2.7.1.1. Источники получения гемопоэтических стволовых клеток 43
2.7.2. Мезенхимальная стволовая клетка 45
2.7.3. Участие клеток костного мозга в репаративной регенерации почки 45
2.7.3.1. Гемопоэтические стволовые клетки в восстановлении канальцевого эпителия после повреждения 46
2.7.3.2. Мезенхимальные стволовые клетки в восстановлении канальцевого эпителия после повреждения 47
2.7.3.3. Стволовые клетки костного мозга в восстановлении клеток клубочка 48
3. Материалы и методы исследования 54
3.1. Объекты исследования 55
3.1.1. Характеристика нефробиоптатов 55
3.1.1.1. Морфологическое исследование нефробиоптатов больных хроническим гломерулонефритом 55
3.1.2. Лабораторные животные 56
3.1.2.1. Забор пуповинной крови 57
3.1.2.2. Выделение мононуклеаров путем седиментации в градиенте плотности фиколла 57
3.1.2.3. Подсчёт количества мононуклеаров и определение их жизнеспособности 58
3.1.2.4. Забор материала и приготовление гистологических срезов тканей 58
3.2. Гистологические и иммуногистохимические методы исследования 59
3.2.1. Депарафинирование и регидратация парафиновых срезов 59
3.2.2. Окрашивание по Ван-Гизону 59
3.2.3. Окрашивание парафиновых срезов биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом антителами к PCNA и а-ГМА 59
3.2.4. Окрашивание парафиновых срезов биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом антителами к CD34HCD31 60
3.2.5. Окрашивание парафиновых срезов почки крысы антителами KHLA-ABC 61
3.3. Оценка выраженности экспрессии CD34 и CD31 клетками клубочка 61
4. Результаты исследования и их обсуждение 63
4.1. Морфологический анализ биоптатов почек больных хроническим гломерулонефритом 63
4.1.1. Экспрессия CD34 и CD31 в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом 64
4.1.2. Морфологические проявления гломерулонефрита 69
4.1.2.1. Изучение присутствия CD34(+)/CD31(-)-клеток в клубочках при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита 70
4.1.2.2. Изучение присутствия CD34(+)/CD31 (-)-клеток в клубочках при различных значениях индекса склероза клубочков 71
4.1.2.3. Изучение изменения индекса склероза клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита 72
4.1.2.4. Изучение изменения уровня мочевины крови больных хроническим гломерулонефритом при различных значениях индекса воспалительной активности заболевания 74
4.1.3. Изучение пролиферативной активности и миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков у больных хроническим гломерулонефритом 75
4.1.3.1. Экспрессия PCNA в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом 76
4.1.3.2. Изучение пролиферативной активности клеток клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита 76
4.1.3.3 Изучение пролиферативной активности клеток клубочков при различных значениях индекса склероза клубочков 80
4.1.3.4. Экспрессия а-ГМА в нефробиоптатах больных хроническим гломерулонефритом 81
4.1.4.4. Изучение миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков при различных значениях индекса воспалительной активности гломерулонефрита 81
4.1.3.5, Изучение миофибробластической трансдифференцировки клеток клубочков при различных значениях индекса склероза клубочков 86
4.1.4. Сопоставление появления CD34(+)/CD31(-)-KneTOK в клубочках с пролиферацией и миофибробластической трансдифференцировкой клеток клубочков 88
4.2. Изучение миграции и распределения трансплантированных мононуклеаров пуповиннои крови человека в интакных почках крыс 91
Заключение 100
Выводы 106
Библиографический список использованной литературы 107
