Введение
2. Обзор литературы 13
2.1 Историческая справка 13
2.2. Эпизоотология африканской чумы свиней и эпизоотическая ситуация в РФ 15
2.3 Структура вириона 18
2.4 Свойства и функции основных диагностически значимых белков вируса АЧС 19
2.5 Культивирование вируса АЧС 23
2.6 Серологические методы диагностики АЧС 27
2.7 Экспресс-диагностика при АЧС 31
2.8 Заключение по обзору литературы 33
3. Собственные исследования 35
3.1. Материалы 35
3.2 Методы 38
4. Результаты собственных исследований 41
4.1 Изучение репродукционных свойств вируса АЧС изолята «Одинцово 02/14» в первичных культурах клеток. 41
4.2 Адаптация вируса АЧС к перевиваемой культуре клеток и изучение его культурально-биологических свойств. 45
4.2.1 Обоснование подбора изолята для адаптации вируса. 45
4.2.2 Обоснование подбора культуры клеток. Адаптация вируса 47
4.3 Изучение биологических свойств адаптированного штамма вируса 52
4.4 Получение типоспецифической гипериммунной сыворотки крови 55
4.5 Определение сероиммунотиповой принадлежности штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1». 56
4.6 Определение генетической принадлежности штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» при нуклеотидном секвенировании 58
4.7 Получение антигена на основе вируса АЧС штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1». 60
4.8 Использование культурального антигена для постановки иммуноблоттинга. Отработка и оптимизация условий постановки реакции 65
4.8.1 Определение рабочего разведения цитоплазматического растворимого вирусного антигена 65
4.8.2 Подбор режима и условий проведения электрофореза 66
4.8.3 Определение режима электропереноса белков на нитроцеллюлозную мембрану 68
4.8.4 Подбор оптимальных параметров постановки реакции иммуноблоттинга 68
4.9 Отработка условий изготовления иммунострипов 70
4.10 Определение основных валидационных характеристик метода иммуноблоттинга 74
4.11. Комиссионные испытания метода 76
4.12 Использование штамма «АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1» и полученного на его основе культурального антигена вируса АЧС для серологических тестов 79
4.12.1 Реакция непрямой иммунофлуоресценции 79
4.12.2 Иммунопероксидазный монослойный анализ 82
4.12.3 Реакция агглютинации латекса 85
5. Заключение 96
5.1 Выводы 99
5.2 Практические предложения 100
5.3 Перспективы дальнейшей разработки темы 100
6. Список сокращений 101
7. Список использованной литературы 103
8. Приложения 119
