Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Структура нервно-мышечного синапса 12
1.1.1. Структура нервной терминали 12
1.1.2. Постсинаптическая область синапса 13
1.2. Брюшная нервная цепочка и иннервация соматической мышцы (дождевого червя) .13
1.2.1.Чувствительность к медиаторам мышечных клеток соматической мышцы дождевого червя 16
1.2.1.1.Ацетилхолин 16
1.2.1.2. Гамма-аминомаслянная кислота 17
1.2.1.3. Адреналин и норадреналин 17
1.2.2. Нервно-мышечные синапсы соматической мускулатуры аннелид (дождевого червя). 18
1.3. Механизмы секреции медиатора 19
1.3.1. Квантово-везикулярная гипотеза секреции медиатора 20
1.3.2. Экзо-эндоцитозный везикулярный цикл 21
1.3.3. Белки «молекулярной» машины везикулярного цикла 23
1.3.4. Кальциевые каналы пресинаптической мембраны. Роль Ca2+ 28
ГЛАВА 2. Объект и методы исследования 30
2.1. Объект исследования и растворы 30
2.2. Оптический метод изучения экзо-эндоцитозного цикла с применением эндоцитозных маркеров 30
2.4. Применение флуоресцентного зонда Dil, переносимого аксонным транспортом из тел мотонейронов в нервные окончания 32
2.5. Количественное определение содержания ацетилхолина в мышце оптическим методом 32
2.6. Иммуноцитохимическая идентификация Н-холинорецепторов, синтаксина 1, синаптотагмина 1, альфа 1В субъединицы Са-каналаN–типа методами конфокальной микроскопии 34
2.7. Использованные химические реактивы 35
2.8. Статистический анализ полученных данных 36
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 37
3.1. Изучение везикулярного цикла в нервных образованиях соматической мышцы37
3.1.1. Определение нервно-мышечных синапсов 37
3.1.2. Доказательства наличия связи между «синаптическими бутономи» и ганглиями брюшной нервной цепочки 39
3.1.3. Изменение МПП нервных окончаний при увеличении К+ в экстраклеточном растворе. 41
3.1.4. Изучение везикулярного цикла с помощью флуоресцентного эндоцитозного красителя FM2-10 44
3.1.5. Роль вне- и внутриклеточного Са2+ в экзо-эндоцитозном цикле 48
3.1.6. Заключение 50
3.2. Зависимость концентрации ацетилхолина в соматической мышце от интенсивности протекания везикулярного цикла в нервно-мышечных синапсах 50
3.2.1. Оптическое определение концентрации ацетилхолина в соматической мышце .50
3.2.2. Заключение 55
3.3. Иммуноцитохимическая идентификация Н-холинорецептора, синаптотагмина 1, синтаксина 1, Са2+ -канала N-типа в двигательных нервно-мышечных синапсах соматической мышцы 55
3.3.1.Определение Н-холинорецепторов в клетках соматической мышцы 55
3.3.2. Определение синаптотагмина 1, синтаксина 1, Са2+ -канала N-типа в двигательных нервно-мышечных синапсах соматической мышцы 60
3.3.3. Заключение 65
Глава 4. Заключение 66
Глава 5. Выводы 70
Список сокращений 71
Список иллюстративного материала 72
Список литературы 74
