Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Антиоксиданты. Защитная, регуляторная и сигнальная функция. Защита от апоптоза 13
1.2. Синтетические антиоксиданты на основе пространственно затрудненных фенолов: фенозанКиИХФАН-10 15
1.3. Эритроциты - клеточная модель для изучения действия биологически активных соединений и АО 21
1.4. Влияние стрессовых факторов и АО на растения 24
1.5. Мелафен - синтетический антиоксидант и регулятор роста растений нового поколения 27
1.6. Действие АТФ, фитогормонов и мелафена на растительные организмы 30
1.7. Влияние биологически активных препаратов на сигнальные системы и регуляторные пути апоптоза клеток 35
ГЛАВА 2. Методика эксперимента 43
2.1 Модель совместного действия недостаточного увлажнения и умеренного охлаждения на субклеточные структуры растений 43
2.2. Выделение митохондрий 43
2.3. Приготовление образцов для АСМ 44
2.4. Действие препаратов на эритроциты in vivo 45
2.5. Выделение эритроцитов 45
2.6. Приготовление образцов эритроцитов для АСМ исследования 46
2.7. Метод АСМ (атомно - силовая микроскопия) 46
2.8. Анализ АСМ имиджей митохондрий 48
2.9. Количественный анализ АСМ имиджей эритроцитов 49
2.10. Метод иммуноблоттинга 49
2.10.1. Электрофорез 49
2.10.2. Перенос белков с ПААГ на нитроцеллюлозную мембрану 51
2.10.3. Блокирование неспецифичных связываний 51
2.10.4. Детекция белков 51
2.11. Опухолевые и низкораковые линии мышей
2.12. Определение перекисного окисления липидов флуоресцентным методом 54
ГЛАВА 3. Исследование действия рострегулятора мелафена на структурные характеристики растительных органелл и животных клеток, и на индукцию белков пути апоптоза в клетках мышей линии АКЭ 56
3.1. Влияние мелафена на морфологию митохондрий проростков гороха при стрессовых воздействиях 56
3.2. Сигнальные свойства мелафена 63
3.3. Исследование морфологических изменений эритроцитов в присутствии и отсутствии глюкозы с помощью метода АСМ 66
3.4. Изменение морфологии эритроцитов мышей при действии препарата мелафен 72
3.5. Влияние мелафена в концентрации 10"10 М на трансдукцию апоптоза. Определение содержания белка- регулятора р53 и антиапоптозного белка Вс1-2 в клетках АКЭ 77
ГЛАВА 4. Исследование действия фенозана К и ИХФАН-10 на структурные характеристики эритроцитов и на трансдукцию белков пути апоптоза животных клеток 82
4.1. Изменение морфологии эритроцитов под действием фенозана К и ИХФАН-10 в системах in vitro и in vivo 82
4.2. Влияние фенозана К и ИХФАН-10 на содержание антиапоптозного белка Вс1-2 в различных клетках 95
Заключение 100
Выводы 107
Список использованной литературы
