Введение
ГЛАВА 1. Влияние глюкокортикоидов и гипоксии на экспрессию ключевых белков каскада апоптоза и их регуляторов в развивающемся головном мозге 9
1.1. Программируемая гибель клеток – апоптоз, и его молекулярные механизмы 9
1.1.1. Каспазы 10
1.1.2. Белки Bcl-2 семейства 12
1.1.3. Пути запуска апоптоза 15
1.2. Нейротрофины – регуляторы жизнеспособности и гибели нервных клеток 16
1.2.1. Экспрессия нейротрофинов и их рецепторов 18
1.2.2. Молекулярные механизмы действия нейротрофинов 24
1.2.3. Нейротрофины и апоптоз в онтогенезе ЦНС 27
1.3. Роль глюкокортикоидов в регуляции апоптоза в развивающейся HC 30
1.3.1. Рецеторы глюкокортикоидов 32
1.3.2. Механизмы действия глюкокортикоидов 35
1.3.3. Эффекты глюкокортикоидов в ЦНС 39
1.3.3.1. Влияние глюкокортикоидов на процессы апоптоза 41
1.4. Эффекты гипоксии на процессы апоптоза в развивающейся нервной системе 43
1.4.1. Молекулярные механизмы влияния гипоксии 44
1.4.2. Совместное влияние гипоксии и глюкокортикоидов на апоптоз в ЦНС 46
Глава 2. Материалы и методы 50
2.1. Животные и экспериментальные воздействия 50
2.1.1. Животные 50
2.1.2. Введение гормонов 50
2.1.3. Моделирование гипоксического состояния 51
2.2. Выделение образцов ткани мозга 52
2.3. Выделение РНК 53
2.4. Получение кДНК 53
2.5. Оценка уровней мРНК белка Bcl-XL методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (real-time PCR) 54
2.6. Выделение суммарного белка и его разделение посредством одномерного денатурирующего гель-электрофореза 57
2.7. Оценка уровней mat-BDNF, pro-BDNF, Bcl-XL, Bax, прокаспазы-3, активной каспазы-3 и GR методом полуколичественного иммуноблота 57
2.8. Реактивы 59
2.9. Статистическая обработка данных 59
Глава 3. Результаты 60
3.1. Анализ взаимного сопряжения экспрессии белков апоптоза в гиппокампе и стволе головного мозга 3-дневных крысят 60
3.2. Экспрессия форм BDNF в отделах мозга неонатальных крысят 63
3.2.А. 3-дневные животные 63
3.2.Б. 8-дневные животные 63
3.3. Влияние глюкокортикоидов на уровни форм BDNF и ключевых белков апоптозного каскада – Bcl-XL, Bax, прокаспазы-3 и активной каспазы-3 – в отделах мозга неонатальных крысят 67
3.3.А. 3-дневные животные 68
3.3.Б. 8-дневные животные 70
3.3.В. Анализ эффектов дексаметазона на уровень активной каспазы-3 в мозге через 6, 24 и 120 ч после введения гормона 75
3.4. Эффекты гипоксии и дексаметазона на экспрессию GR в неонатальном мозге 76
3.5. Влияние гипоксии и дексаметазона на экспрессию ключевых белков апоптозного каскада в отдех мозга неонатальных крысят 81
3.5.А. Эффекты гипоксии 81
3.5.Б. Эффекты дексаметазона на фоне предшествующей и последующей гипоксии 83
Глава 4. Обсуждение результатов 91
Выводы 109
Библиографический список 110
