Введение
1. Введение 7
2.1. 5-липоксигеназа: регуляция активности фермента в клетке и синтез лейкотриеноб 11
2.1.1. 5-Липоксигеназа:реакции 13
2.1.2. 5-LO: структура гена и регуляция экспрессии 14
2.1.3.Факторы, регулирующие активность 5-LO 16
2.1.3.1. Кальций 16
2.1.3.2-АТР 18
2.1.3.3- Фосфсшшиды 19
2.1.3.4 ЛипидЕые гидропсроксиды 20
2.1.3.5. Стимуляция клеточными белками 20
2.1.3.6. 5-1.0-актиБирующий белок (FLAP) 21
2.1.4 Внутриклеточное распределение 5-LO. Роль FLAP 22
2.1.5. Регуляция активности 5-LO в клетки 27
2.1.5.1. Активация 5-LO фосфорилированием 31
2.1.5.2. Эндогенные ингибиторы 5-лилоксигеиазного пути 34
2.1.5.3, Белковые взаимодействия 5-LO 37
2.1.6. Роль лейкотриенов в воспалительных процессах и пути подавления леикотрненового синтеза 39
2.1.6.1, Биологическое действие лейкотриенов 40
2.1.6.2. Направленное генетическое подавление 5-LO 41
2.1.6.3, Ингибиторы биосинтеза лейкотриенов 41
2.1.6.3.1, Ингибиторы FLAP 42
2.1.6.3.2. Прямые ингибиторы 5-LO 44
2.1.6.3.2.1. О кис лите ль но-восстановительные ингибиторы 44
2.1.6.3.2.2. Рс-лигандныс со слабыми окислительно-восстановитс лышми свойствами 44
2.1.6.3.2.3. «Не окислительно-восстановительные» конкурентные ингибиторы 5-LO 45
2.2 Сульфат холестерина: биосинтез и биологическая роль 48
2.2.1. СХ в плазме крови 49
2.2.2. Распределение СХ в тканях 50
2.2.3. Синтез и метаболизм СХ 51
2.2.4. Холестериновые сульфотрансферазы 52
2.2.5.Физиологическая значимость СХ 53
2.2.5.1. Синтез стероидов 53
2.2.5.2. Метаболизм липидов 54
2.2.5.3. Мембранные эффекты СХ 54
2.2.5.4. Участие СХ в регуляции ферментов 55
3. Исследование влияния холестерина и его эфиров на синтез лейкотриенов 5-липоксигеназой клеток млекопитающих 5Й
3.1 Действие холестерина и ею производных на сиптез иродукі ов 5-LO активности в нейтрофилах человека в суспензии и при взаимодействии с различными биологическими поверхностями. 59
3.1.1 Подавление синтеза лейкотриенов свободным холестерином и его производными и PMNL 60
3.1.2. Экзогенная АА нивелирует ингибирующее воздействие X н СХ на синтех лейкотриенов 62
3.1.3. СХ стимулирует адгезию PMNL к коллагену и эндотелию 64
3.1.4. Влияние СХ на доступность субстрата для 5-LO 68
3.1.4.1 СХ препятствует высвобождению АА в PMNL 69
3.1.4.2. СХ вытеспяет cPLA2 ш ядерной мембраны PMNL 70
3.1.5, СХпрспятсівуетіранслиКйцин 5-LO к ядерной мембране PMNL 71
3.1.6, СХ подавляет активность 5-LO в цитозольной фракции PMNL 72
3.1.7, Исследование роли отрицательного заряда эфиров холестерина в подавлении синтеза лейкотриенов. 73
3.1.7.1. Синтез фосфата холестерина (ФХ) 74
3.1.7.2. Сравнение эффективности СХ и ФХ на разных типах клеток 74
3.1.8, Изучение кинетических закономерностей ингибировиния 5-LO иниопиыми производными холестерина 76
3.1.8.1, СХ и ФХ подавляют синтез LTs в суспензионных клетках и клеточных гомогенатах 76
3.1.8.2, Получение кинетических характеристик ингибирования 5-LO под действием ФХ 78
3.1.9 Синтез лийкотриснов зависит oi содержания холестерина в клеточных мембранах 81
3.1.9.1.. Холестерин и СХ оказывают кумулятивное воздействие на синтез лейкотриенов 82
3.1.9.2. Действие MJ3CD 83
3.1.9.2.1. MpCD увеличивает высвобождение А А из состава мембран 83
3.1.9.2.2. Подавление синтеза лейкотриенов под действием СХ снимается при помощи MpCD 84
3.1.9.3. Действие комплекса ПЭГ-холестерин 86
3.2 Эффект СХ чувствителен к ингибиторам эндоцитоза 87
3.3 Влияние эфиров холестерина на экспрессию 5-LO в различных клетках Гипотеза о роли ядерных рецепторов в регуляции экспрессии 5-LO на уровне транскрипции 90
3.3.1. СХ способен подавлять экспрессию 5-LO в PMNL 90
3.3.2. Гипотеза об участии ретиноидных ядерных рецепторов RORrtl в регулировании экспрессии 5-LO 91
4. Эксперименталъная часть 96
4.1.Реактивы и материалы 96
4.2. Методы исследовании. 98
