Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Морфологические особенности и молекулярно-генетическая организация моноцитов и макрофагов 11
1.2. Молекулярно - генетический механизм апоптоза 15
1.2.1 Генетические аспекты программируемой клеточной гибели 16
1.2.2. Молекулярные механизмы передачи информации в ядро клетки 20
1.3. Влияние липидов на генетические процессы 21
1.3.1 Роль липидов в рецепции и внутриклеточной сигнализации 21
1.3.2. Эффекторные пути в регуляции апоптоза. Роль липидных доменов в функционировании клеточных рецепторов 26
1.3.3. Фагоцитоз погибающих клеток 31
1.3.4. Липиды ядра клеток в норме 33
1.3.5. Липидный состав ядер раковых клеток 3 5
1.4. Рак - болезнь генома. Апоптоз и рак 38
1.4.1. Ключевые гены, мутации в которых, предрасполагают к
раку молочной железы 38
1.4.2. Апоптоз при онкологических заболеваниях 45
Глава 2. Материалы и методы 48
2.1. Материалы исследования 48
2.1.1. Объект исследования 48
2.2. Методы исследования 48
2.2.1. Выделение моноцитов из гепаринизированной крови 48
2.2.1.1 .Постановка эксперимента 49
2.2.2. Определение жизнеспособности клеток 49
2.2.3. Выделение ДНК ядерных клеток крови 50
2.2.4.Электрофорез ДНК моноцитов в агарозном геле 51
2.2.5. Приготовление агарозного геля 51
2.2.4. Световая и флуоресцентная микроскопия моноцитов 52
2.2.5. Окрашивание моноцитов по Паппенгейму-Крюкову 52
2.2.6. Окрашивание моноцитов акридиновым оранжевым 53
2.2.7. Окрашивание моноцитов Hoechst 33258 53
2.2.10. Получение липосом 54
2.3.Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР) 54
2.3.1. Проведение ПЦР для определения мутации 5382insC в 20 экзоне гена BRCA1 54
2.3.2. Проведение ПЦР для определения мутации 185delAG во 2 экзоне гена BRCA1 55
2.3.3. Проведение ПЦР для определения мутации 4154delA вії экзоне гена BRCA1 55
2.3.4.Проведение ПЦР для определения мутации 6174delT в 11 экзоне BRCA2 56
2.3.5. Проведение ПЦР для определения мутации Arg72Pro (R72P) р53 56
2.3.6. Методика проведения электрофореза в ПААГе 57
2.3.7. Окраска геля 58
2.3.8. Молекулярное моделирование взаимодействия липидов с ДНК 58
2.3.9. Постановка обратной транскрипции 59
2.3.10. Статистическая обработка данных 60
Глава 3. Результаты исследований 61
3.1 Морфологические особенности моноцитов в норме и при раке молочной железы 61
3.2. Выявление частот мутантных аллелей генов, предрасполагающих
к раку молочной железы 65
3.3. Влияние перекиси водорода и стауроспорина на гибель моноцитов, особенности фрагментации ДНК в норме и при раке молочной железы 70
3.4. Влияние липидов на индуцированный перекисью водорода и стауроспорином апоптоз моноцитов 75
3.5. Моделирование методом молекулярной механики взаимодействий липидов с ДНК 82
3.6. Влияние холестерола на экспрессию генов раннего ответа 88
Глава 4. Обсуждение 92
Выводы 99
Практические рекомендации 100
Список литературы 101
