Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Строение и функции кожи 14
1.2. Старение кожи
1.2.1. Клеточное старение 18
1.2.2. Окислительный стресс 21
1.2.3. Хроническое воспаление 23
1.2.4. Дезорганизация внеклеточного матрикса 28
1.3. Регенерация фетальной и взрослой кожи 33
1.4. Препараты для подавления процессов старения и восстановления нормальной физиологии кожи 40
1.5. Культура клеток как модель для исследования. Современное состояние проблемы получения и культивирования клеток человека и животных 45
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 55
2.1. Выделение и культивирование фибробластов из дермы кожи человека.. 55
2.1.1. Получение 2D культуры дермальных фибробластов человека 55
2.1.2. Контроль контаминации 57
2.1.3. Криоконсервация клеток 58
2.1.4. 3D культивирование дермальных фибробластов человека
2.2. Исследование влияние р199 на функциональную активность дермальных фибробластах в условиях патофизиологического процесса 59
2.2.1. Моделирование процесса «заживления» после повреждения монослоя дермальных фибробластов путем миграции клеток 59
2.2.2. Моделирование повреждения ткани на 3D культуре дермальных фибробластов человека 60
2.3. Методы гистологии, иммуноцитохимии и молекулярной биологии 61
2.3.1. Подсчет и анализ жизнеспособности монослойной культуры дермальных фибробластов человека 61
2.3.2. Фиксация 2D и 3D культуры дермальных фибробластов человека 62
2.3.3. Морфологический анализ 2D культуры дермальных фибробластов 63
2.3.4. Иммуноцитохимический анализ дермальных фибробластов человека. 63
2.3.5. Детекция провоспалительных белков методом иммуноблота 64
2.4. Статистический анализ 65
ГЛАВА 3. Результаты 69
3.1. Получение штаммов дермальных фибробластов человека 69
3.2. Характеристика 2D культуры дермальных фибробластов человека
3.2.1. Контроль контаминации 70
3.2.2. Морфологический анализ 2D культуры дермальных фибробластов 72
3.2.3. Иммуноцитохимический анализ 2D культуры дермальных
3.3. Подбор разведения олигопептида р199 для последующих экспериментов на 2D культуре дермальных фибробластов человека 78
3.4. Исследование биоактивного эффекта олигопептида р199 на 2D культуру дермальных фибробластов 85
3.5. Исследование влияния олигопептида р199 на миграционную активность фибробластов на модели повреждения монослоя в 2D культуре 94
3.6. Исследование биоактивного эффекта олигопептида р199 на 3D культуру дермальных фибробластов 96
3.6.1. Исследование формирования сфероидов из дермальных фибробластов 3.6.2. Исследование влияния р199 на экспрессию функциональных белков дермальных фибробластов человека в 3D культуре 98
3.7. Моделирование повреждения ткани в 3D культуре дермальных фибробластов человека 105
3.8. Исследование содержания провоспалительных факторов в 3D культуре дермальных фибробластов человека 108
ГЛАВА 4. Обсуждение
Заключение 124
Выводы 128
Список используемой литературы
