Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1 Физиологические функции про- и антиоксидантых систем, роль окислительного стресса в развитии патологии 10
1.1.1 Дыхательная цепь митохондрий и образование активных форм кислорода 10
1.1.2 Пероксид водорода и его физиологическая роль 12
1.1.3 Повышение уровня активных форм кислорода в клетке — окислительный стресс, его роль в норме и патологии 14
1.1.4 Антиоксидантная система клетки. Каталаза как компонент антиоксидантной защиты 16
1.2 Дефекты каталазы и жизнеспособность клеток в условиях окислительного стресса. 18
1.3 Апоптоз как вариант реакции на окислительный стресс 21
1.3.1 Сигнальные пути апоптоза. 22
1.3.2 Роль нарушений апоптоза в процессах опухолевого роста 25
1.4 Изучение механизмов апоптоза. Роль митохондриального белка-транслокатора TSPO в реализации апоптоза 27
1.4.1 Периферический бензодиазепиновый рецептор (TSPO) как маркер митохондриального пути передачи апоптотического сигнала 27
Глава 2. Материал и методы исследования 30
2.1 Культивирование клеток 31
2.2 Индукция окислительного стресса 31
2.3 Методы морфологического исследования 33
2.3.1 Оценка уровня апоптоза 33
2.4 Методы молекулярно-генетического исследования 33
2.4.1 Выделение ДНК 33
2.4.2 ПДРФ анализ 35
2.4.3 Выделение мРНК 37
2.4.4 ПЦР в реальном времени 37
2.5 Биохимические методы исследования 38
2.5.1 Измерение активности антиоксидантных ферментов 38
2.6 Статистическая обработка результатов 40
Глава 3. Результаты собственных исследований 43
3.1 Формирование групп нормальных клеток с различной активностью каталазы 43
3.1.1 Распределение полиморфизма С-262Т гена CAT в мононуклеарных лейкоцитах 43
3.1.2 Определение активности каталазы в эритроцитах людей с различными вариантами полиморфизма С-262Т гена каталазы 45
3.2 Сравнение распределения полиморфизма С-262Т гена каталазы в здоровых и опухолевых клетках 46
3.3 Определение активности каталазы в лейкоцитах периферической крови в состоянии окислительного стресса 50
3.4 Оценка выраженности апоптоза клеток при индукции окислительного стресса 51
3.5 Определение уровня экспрессии белка-транслокатора (TSPO) в лейкоцитах при индукции окислительного стресса в клетках в зависимости от полиморфизма С-262Т гена каталазы 60
Глава 4. Обсуждение результатов 63
Выводы 83
Практические рекомендации 84
Список литературы 85
