Введение
Обзор литературы 11
1.1. Тубулярные иммуностимулирующие комплексы 11
1.1.1. Прототипы тубулярных иммуностимулирующих комплексов - ISCOM и ISCOMATRIX 11
1.1.2. Общая характеристика тубулярного иммуностимулирующего комплекса 13
1.2. Физико-химические и биологические свойства полярных липидов морских макрофитов 18
1.2.1. Физико-химические свойства гликолипидов морских макрофитов 18
1.2.2. Иммунологические свойства полиненасыщенных жирных кислот 21
1.3. Биологические свойства тритерпеновых гликозидов 26
1.3.2. Биологическая активность тритерпеновых гликозидов голотурий 27
1.3.2. Тритерпеновые гликозиды дальневосточной голотурии Cucumaria japonica 31
1.4. Липид-белковые взаимодействия, конформация белков и ее связь с
иммуногенностью 34
2. Материалы и методы 45
2.1. Биологические объекты 45
2.2. Экстракция липидов 46
2.3. Тонкослойная хроматография 46
2.4. Системы растворителей для ТСХ липидов и кукумариозидов 46
2.5. Обнаружение липидов и кукумариозидов 47
2.6. Выделение гликолипидов 47
2.7. Выделение фосфатидилхолина 48
2.8. Выделение фосфатидилэтаноламина з
2.9. Анализ состава жирных кислот глико- и фосфолипидов 49
2.10. Определение микровязкости моногалактозилдиацилглицерина 50
2.11. Выделение кукумариозидов 50
2.12. ЯМР-спектроскопия 53
2.13. Получение тубулярных иммуностимулирующих комплексов 53
2.14. Введение антигенов в тубулярный иммуностимулирующий комплекс 54
2.15. Электронная микроскопия 55
2.16. Иммунизация животных 56
2.17. Получение сывороток крови 57
2.18. Анализ сывороток крови иммунизированных животных 57
2.19. Приготовление образцов для калориметрических и спектроскопических исследований 58
2.20. Дифференциальная сканирующая калориметрия 59
2.21. Флуоресцентная спектроскопия 60
2.22. Круговой дихроизм 60
3. Результаты и обсуждение 61
3.1. Физико-химические свойства моногалактозилдиацил-глицерина из морских макрофитов, используемого для приготовления тубулярных иммуностимулирующих комплексов 62
3.1.1. Жирнокислотный состав моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов 62
3.1.2. Микровязкость моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов 64
3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию порина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов 65
3.2.1. Выбор антигенной формы порина 65
3.2.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из морских макрофитов на образование антипориновых антител 67
3.2.3 Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на цитокиновый профиль 69
3.2.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на конформацию порина 71
3.2.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия 71
3.2.4. 2. Собственная флуоресценция порина 75
3.2.4.3. Круговой дихроизм 78
3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных видов морских макрофитов на иммуногенность и конформацию гемагглютинина в составе тубулярных иммуностимулирующих комплексов 80
3.3.1. Характеристика рекомбинантного мономера гемагглютинина вируса тршша A/Rim (A/Califomia/07/2009) 81
3.3.2. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на образование антител против гемагглютинина 83
3.3.3. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из разных морских макрофитов на цитокиновый профиль 84
3.3.4. Влияние моногалактозилдиацилглицерина из различных морских макрофитов на конформацию гемагглютинина
3.3.4.1. Дифференциальная сканирующая калориметрия 86
3.3.4.2. Собственная флуоресценция гемагглютинина 88
3.3.4.3. Круговой дихроизм 91
3.4. Жирнокислотный состав, комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих и их влияние на иммуногенность человеческого сывороточного альбумина в составе ТИ-комплексов 93
3.4.1. Жирнокислотный состав фосфолипидов из иглокожих 93
3.4.2. Комплексообразующие свойства фосфолипидов из иглокожих 95
3.4.3. Влияние фосфолипидов из иглокожих на образование антител против человеческого сывороточного альбумина 96
3.4.4. Влияние фосфолипидов из морских иглокожих на цитокиновый профиль 98
3.5. Структура, комплексообразующие свойства кукумариозидов и их влияние на
иммуногенность белковых антигенов ТИ-комплексов 100
3.5.1. Характеристика структуры кукумариозидов из Cucumaria japonica 100
3.5.2. Комплексообразующие свойства кукумариозидов Cucumaria japonica. 101
3.5.3. Влияние различных кукумариозидов на иммуногенность и конформацию порина 1 3.5.3.1. Влияние кукумариозидов на иммуногенность порина 104
3.5.3.2. Влияние различных кукумариозидов на конформацию порина 108
3.5.4. Влияние различных кукумариозидов на иммуногенность человеческого
сывороточного альбумина 110
3.5.4.1. Влияние различных кукумариозидов на образование антител против человеческого сывороточного альбумина 110
3.5.4.2. Влияние различных кукумариозидов на цитокиновый профиль 112
Выводы 115
Список литературы
