Введение
1. Обзор литературы 14
1.1. Внеклеточный матрикс: структура, свойства и функции 14
1.2. Децеллюляризированный ВКМ 15
1.3. Применение очищенного ВКМ в медицине 20
1.4. Регенерация, репарация, процесс заживления ран 21
1.4.1. Регенерация и репарация 21
1.5. Ответ организма хозяина на введение очищенного ВКМ 27
1.6. Роль Мф в заживлении ран 30
1.6.1. Роль Мф в процессе заживления ран 30
1.6.3. Роль Мф М1 в заживлении ран 34
1.6.4. Роль Мф M2 в заживлении ран 35
1.7. Конструктивное ремоделирование 36
1.8. Th1 / Th2 ответ на биоматериалы при имплантации 38
1.9. Роль Мф M1 и M2 в РИТ 40
1.10. Поляризация Мф, зависящая от структурных свойств биоматериала 42
1.10.1. Топография поверхности биоматериалов 43
1.10.2. Пористость биоматериалов 46
1.11. Использование сигналов микроокружения для контролируемой 48
1.12. Заключение обзора литературы 49
2. Материалы и методы исследования 51
2.1. Очистка ВКМ и получение из него мембраны, порошка, суспензии и гидрогеля 51
2.1.1. Очистка ВКМ 51
2.1.2. Изготовление порошка ВКМ 52
2.1.3. Изготовление суспензии волокон ВКМ 52
2.1.4. Изготовление гидрогеля 53
2.2. Исследование структуры и свойств ВКМ в форме мембраны, порошка, суспензии, гидрогеля 53
2.2.1. Гистологическое исследование ВКМ 53
2.2.2. Сканирующая электронная микроскопия 54
2.2.3. Атомно-силовая микроскопия 55
2.2.4. Электрофорез в ПААГ в присутствии додецилсульфата натрия по Лэммли 55
2.2.5. Количественное определение дцДНК в образцах очищенного ВКМ 56
2.2.6. Определение термомеханических свойств 56
2.3. Характеристика тканевой реакции при имплантации ВКМ 57
2.3.1. Подкожная имплантация порошка, суспензии, гидрогеля 57
2.3.2. Подкожная имплантация ВКМ в форме мембраны 58
2.3.3. Макроскопический анализ биодеградации 59
2.3.4. Гистологическое исследование образцов тканей 60
2.3.5. Характеристика тканевой реакции 60
2.4. Модель полнослойной кожной раны 63
2.4.1. Группа: суспензия, гидрогель 63
2.4.2. Группа: мембрана, порошок, гидрогель 65
2.5. Анализ маркеров Мф и Th-лимфоцитов 66
2.5.1. Иммуногистохимическое исследование 66
2.5.2. Анализ поляризации Мф по профилям М1 и М2 68
2.6. Статистическая обработка результатов 68
3.1. Общая схема работы 69
3.2. Очистка ВКМ и изготовление форм, соответствующих разным уровням организации 70
3.2.1. Очистка ВКМ 70
3.2.2. Получение форм, соответствующих разным уровням структурной организации ВКМ 77
3.3. Тканевая реакция на имплантацию исследуемых форм ВКМ 81
3.3.1. Имплантация ВКМ в форме порошка, суспензии и гидрогеля 81
3.3.2. Имплантация ВКМ в форме мембраны 92
3.4. Оценка влияния разных форм ВКМ на процесс заживления раны 95
3.4.1. Исследование форм: суспензия, порошок 95
3.4.2. Исследование форм: мембрана, порошок, гидрогель 101
3.5. Анализ маркеров Мф и Th-лимфоцитов 107
3.5.1. Исследование форм ВКМ: порошок, суспензия, гидрогель 108
3.5.2. Исследование форм ВКМ: суспензия, контроль 119
3.5.3. Исследование форм ВКМ: гидрогель, контроль 121
3.5.4. Исследование форм ВКМ: мембрана, контроль 122
4. Обсуждение 127
5. Заключение 135
7. Список литературы 138
Приложение 157
Данные анализа тканевой реакции 157
