ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................... 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................... 15
1.1. Прегнан Х рецептор ............................................................................................... 15
1.1.1. Структура прегнан Х рецептора ........................................................................ 15
1.1.2. Функции прегнан Х рецептора .......................................................................... 17
1.1.3. Механизмы регуляции прегнан Х рецептора................................................... 20
1.1.4. Лиганды прегнан Х рецептора........................................................................... 25
1.2. Конститутивный андростановый рецептор ......................................................... 27
1.2.1. Структура конститутивного андростанового рецептора ................................ 27
1.2.2. Функции конститутивного андростанового рецептора................................... 29
1.2.3. Механизмы регуляции конститутивного андростанового рецептора ........... 31
1.2.4. Лиганды конститутивного андростанового рецептора ................................... 33
1.3. Сигнальная роль пероксида водорода и оксида азота (II) ................................. 34
1.3.1. Сигнальная роль пероксида водорода............................................................... 34
1.3.2. Сигнальная роль оксида азота (II)..................................................................... 37
1.3.3. Влияние пероксида водорода и доноров NO на прегнан Х рецептор и
конститутивный андростановый рецептор................................................................. 39
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .............................. 41
2.1. Объект исследования ............................................................................................. 41
2.2. Культивирование клеток ....................................................................................... 41
2.3. Дизайн исследования ............................................................................................. 41
2.3.1. Влияние пероксида водорода на прегнан X рецептор и конститутивный
андростановый рецептор .............................................................................................. 41
2.3.2. Влияние S-нитрозоглутатиона на прегнан X рецептор и конститутивный
андростановый рецептор .............................................................................................. 43
2.4. Цитотоксический тест (МТТ-тест)....................................................................... 44
2.5. Получение тотальных клеточных лизатов для биохимических исследований44
2.6. Получение тотальных клеточных лизатов для вестерн-блота........................... 45
3
2.7. Оценка выраженности окислительного стресса ................................................. 45
2.8. Оценка выраженности нитрозативного стресса.................................................. 46
2.9. Определение относительного количества прегнан Х рецептора и
конститутивного андростанового рецептора ............................................................. 47
2.10. Определение внутриклеточной локализации прегнан Х рецептора и
конститутивного андростанового рецептора ............................................................. 48
2.11. Статистический анализ........................................................................................ 49
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ...................................................... 50
3.1. Влияние пероксида водорода на биохимические изменения в клетках линии
Caco-2.............................................................................................................................. 50
3.2. Влияние пероксида водорода на относительное количество и
внутриклеточную локализацию прегнан Х рецептора и конститутивного
андростанового рецептора............................................................................................ 56
3.3. Влияние малонового диальдегида на относительное количество прегнан Х
рецептора и конститутивного андростанового рецептора ..................................... 63
3.4. Оценка роли Nrf2 в индукции прегнан Х рецептора и конститутивного
андростанового рецептора под действием пероксида водорода .............................. 66
3.5. Оценка роли прегнан Х рецептора и конститутивного андростанового
рецептора в защите клеток от окислительного стресса ............................................ 68
3.6. Влияние S-нитрозоглутатиона на биохимические изменения в клетках линии
Caco-2.............................................................................................................................. 70
3.7. Влияние S-нитрозоглутатиона на относительное количество и
внутриклеточную локализацию прегнан Х рецептора и конститутивного
андростанового рецептора............................................................................................ 78
3.8. Влияние битирозина на относительное количество прегнан Х рецептора и
конститутивного андростанового рецептора ............................................................. 84
3.9. Оценка роли NO-цГМФ-сигнального пути в индукции прегнан Х рецептора и
конститутивного андростанового рецептора под действием
S-нитрозоглутатиона..................................................................................................... 88
4
3.10. Оценка роли прегнан Х рецептора и конститутивного андростанового
рецептора в защите клеток от нитрозативного стресса.............................................91
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.............................................94
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.........................................................................................................102
ВЫВОДЫ....................................................................................................................103
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ................................................................105
ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ.............................106
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.....................................................................................107
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................................................112
