Введение
Глава 1. Роль антибактериальных пептидов в иммунитете насекомых 11
1.1. Представление об иммунитете насекомых .11
1.2. Антибактериальные пептиды насекомых 18
1.2.1. Многообразие антибактериальных пептидов насекомых 18
1.2.2. Особенности экспрессии генов антибактериальных пептидов...25
1.2.3. Механизм действия антибактериальных пептидов 29
1.3. Иммунитет и система антибактериальных пептидов медоносной пчелы 31
1.3.1. Иммунитет медоносной пчелы 31
1.3.2. Антибактериальные пептиды медоносной пчелы 38
Глава 2. Материалы и методы исследований 45
2.1. Характеристика объектов исследования 45
2.2. Описание исследованных регионов 49
2.3. Методы исследования антибактериальных пептидов медоносной пчелы 52
2.3.1. Консервация пчел для перевозки и хранения 52
2.3.2. Выделение ДНК и РНК 53
2.3.3. Амплификация тотальной ДНК 54
2.3.4. Электрофоретическое фракционирование ДНК 55
2.3.5. Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами 56
2.3.6. Перенос РНК на мембранные фильтры 57
2.3.7. Радиоактивное мечение препаратов ДНК 58
2.3.8. Молекулярная гибридизация 59
2.3.9. Элюция ДНК из агарозных гелей 59
2.3.10. Клонирование фрагментов генов антибактериальных пептидов медоносной пчелы 60
2.3.11. Подготовка компетентных клеток Е. coli 62
2.3.12. Трансформация компетентных клеток.со/і ішазмидной ДНК 62
2.3.13. Выделение и очистка одноцепочечной фагмидной ДНК 63
2.3.14. Секвенирование ДНК ферментативным методом 64
2.3.15. Электрофоретическое фракционирование ДНК в денатурирующих условиях (секвенирующий гель-электрофорез) 66
2.3.16. Составы использованных стандартных растворов 67
2.4. .Методы идентификации расового происхождения 68
2.4.1. Морфометрический анализ 68
2.4.2. Анализ полиморфизма мтДНК (локус СОІ-СОП) 69
2.5. Компьютерный анализ и статистическая обработка результатов 70
Глава 3. Амплификация и поиск полиморфизма участков генов антибактериальных пептидов абецина, гименоптецина и дефензина медоносной пчелы Apis mellifera L 72
3.1. Анализ известных нуклеотидных последовательностей и подбор праймеров 72
3.2 Определение нуклеотидной последовательности и идентификация полученных ПЦР-амшшфицированных фрагментов 78
3.3 Полиморфизм генов антибактериальных пептидов медоносной пчелы...84
Глава 4. Экспрессия генов антибактериальных пептидов (абецина, гименоптецина, дефензина) у медоносной пчелы Apis mellifera L 88
4.1 Экспрессия генов антибактериальных пептидов Apis mellifera (абецина, гименоптецина, дефензина) в ходе инфекционного процесса и при действии адаптогена (эксперимент I) 90
4.2. Межрасовые различия характера экспрессии генов антибактериальных пептидов абецина, гименоптецина, дефензина у пчел Apis mellifera mellifera и Apis mellifera cancasica (эксперимент II) 97
Глава 5. Полиморфизм гена дефензина в башкирской популяции медоносной пчелы Apis mellifera 109
5.1. Гетерогенность субпопуляций медоносной пчелы по полиморфному локусу гена дефензина 111
5.2. Интегральная гетерогенность субпопуляций РБ 119
Выводы 134
Список литературы 136
