ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................. 11
1.1 Общая характеристика аутоиммунных ревматических заболеваний ......... 11
1.2 Связь аутоиммунных ревматических заболеваний и атеросклероза .......... 13
1.3 Ревматоидный артрит ....................................................................................... 16
1.4 Системный склероз ........................................................................................... 17
1.5 Системная красная волчанка ........................................................................... 18
1.6 Атеросклероз ..................................................................................................... 19
1.7 Общая информация о моноцитах и макрофагах ........................................... 20
1.8 Роль моноцитов и макрофагов в инициации и прогрессировании аутоиммунных ревматических заболеваний ........................................................... 22
1.8.1 Роль моноцитов и макрофагов при ревматоидном артрите ...................... 24
1.8.2 Роль моноцитов и макрофагов при системном склерозе .............................. 27
1.8.3 Роль моноцитов и макрофагов при системной красной волчанке ........... 28
1.9 Роль моноцитов и макрофагов при атеросклерозе ........................................ 31
1.10 Связь дисфункции митохондриальной ДНК с развитием аутоиммунных ревматических заболеваний ...................................................................................... 32
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .......................................................................... 35
2.1 Пациенты и доноры .......................................................................................... 35
2.2 Получение цельной крови ............................................................................... 36
2.3 Выделение CD14+ моноцитов из цельной крови .......................................... 36
2.4 Схема культивирования моноцитов ............................................................... 37
2.5 Проточная цитометрия ..................................................................................... 40
2.6 Выделение ДНК из суспензии CD14+ моноцитов ......................................... 40
2.7 Подбор праймеров для ПЦР в реальном времени и цифровой ПЦР........... 40
2.8 Метод ПЦР в реальном времени ..................................................................... 41
2.9 Метод цифровой ПЦР ...................................................................................... 42
2.10 Измерение количества цитокинов методом ИФА ......................................... 43
2.11 УЗИ сонных артерий ........................................................................................ 44
2.12 Статистический анализ .................................................................................... 45
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .............................................................. 47
3.1 Клинические характеристики анализируемых групп ................................... 47
3.2 Субпопуляционный состав моноцитов, выделенных из цельной крови .... 53
3.3 Количественная оценка мтДНК ...................................................................... 54
3.4 Оценка процента гетероплазмии..................................................................... 57
3.5 Исследование культуральной жидкости для определения уровня секреции провоспалительных цитокинов ................................................................................ 60
3.5.1. Базальная секреция ФНО-α, ИЛ-1β, CCL2 и ИЛ-8 .................................... 60
3.5.2. ЛПС-стимулированная секреция ФНО-α, ИЛ-1β, CCL2 и ИЛ-8 .............. 66
3.5.3. Рестимулированная секреция ФНО-α, ИЛ-1β, CCL2 и ИЛ-8 ................... 71
3.5.4. Секреция ФНО-α, ИЛ-1β, CCL2 и ИЛ-8 без повторной стимуляции ...... 77
3.6 Оценка связи между клиническими характеристиками, экспрессией цитокинов и маркерами митохондриальной дисфункции ..................................... 84
3.7 Оценка маркеров атеросклеротического поражения в анализируемых группах ........................................................................................................................ 87
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ................................................................. 91
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ........................................................................................................... 104
ВЫВОДЫ ..................................................................................................................... 107
БЛАГОДАРНОСТИ .................................................................................................... 109
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ......................................................................................... 110
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................... 113
