Введение
1. Аналитический обзор 10
1.1. Характеристика исследуемых ферментов рыб и других позвоночных животных 10
1.1.1. Пепсины 11
1.1.2. Трипсины 25
1.1.3. Химотрипсины 39
1.1.4. Эластазы 47
1.1.5. Аминопептидазы 53
2. Материал и методы 59
2.1. Материал и реактивы 59
2.2. Очистка ферментов 59
2.2.1. Приготовление водных экстрактов, определение инактивации исследуемого материала при обработке ацетоном 60
2.2.2. Осаждение белков сульфатом аммония, диализ, концентрирование растворов 61
2.2.3. Гель-хроматография, обессоливание препаратов 63
2.2.4. Ионообменная хроматография 64
2.2.5. Изоэлектрофокусирование, определение изоэлектрических точек ферментов 65
2.3. Определение активности ферментов 66
2.3.1. Определение активности протеиназ по природным субстратам 66
2.3.2. Определение активности протеиназ по синтетическим субстратам 69
2.4. Определение количества белка 71
2.5. Изучение физико-химических свойств ферментов 71
2.5.1. Определение диапазонов рН стабильности и активности 72
2.5.2. Определение температурного оптимума действия 73
2.5.3. Определение влияния ионов металлов и ингибиторов 73
2.5.4. Определение молекулярных масс 74
2.6. Статистическая обработка результатов 75
3. Результаты исследования и их обсуждение 76
3.1 Анатомо-гистологические особенности пищеварительного тракта сома 76
3.2. Выделение и очистка протеолитических ферментов сома европейского 81
3.2.1. Определение содержания протеиназ в желудочно-кишечном тракте и влияние обработки ацетоном на их активность 81
3.2.2. Осаждение исследуемых ферментов сульфатом аммония 84
3.2.3. Разделение и обессоливание водорастворимых белков слизистой оболочки желудка гель-хроматографией ...87
3.2.4. Определение изоэлектрических точек протеиназ слизистой оболочки желудка 91
3.2.5. Разделение ферментов слизистой оболочки желудка ионообменной хроматографией 94
3.2.6. Разделение и обессоливание водорастворимых белков поджелудочной железы гель-хроматографией 99
3.2.7. Определение изоэлектрических точек протеиназ поджелудочной железы 101
3.2.8. Разделение ферментов поджелудочной железы ионообменной хроматографией 105
3.3. Свойства протеолитических ферментов сома европейского 115
3.3.1. Пепсины 115
3.3.2. Трипсины 122
3.3.3. Химотрипсины 129
3.3.4. Эластазы 134
3.3.5. Аминопептидазы 138
Заключение 142
Выводы 146
Список литературы 148
