ВВЕДЕНИЕ............................................................................................................................................ 4
ГЛАВА 1. ВТОРИЧНЫЕ МЕТАБОЛИТЫ ГРИБОВ РОДА ALTERNARIA И ИХ
ВОЗМОЖНАЯ РОЛЬ В АНТАГОНИСТИЧЕСКИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯХ С
НАСЕКОМЫМИ.................................................................................................................................. 9
1.1 Грибы рода Alternaria как продуценты биологически активных вторичных метаболитов .. 9
1.2 Типы возможных антагонистических взаимоотношений грибов рода Alternaria и
насекомых.......................................................................................................................................... 21
1.3 Тенуазоновая кислота как модельный токсин для изучения энтомотоксических свойств
грибных метаболитов....................................................................................................................... 22
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ..................................................... 27
2.1 Объекты исследования............................................................................................................... 27
2.1.1 Штаммы гриба...................................................................................................................... 27
2.1.2 Тест-организмы.................................................................................................................... 27
2.2 Видовая идентификация ............................................................................................................ 29
2.2.1 Изучение морфологических признаков ............................................................................. 29
2.2.2 Молекулярно-генетические методы................................................................................... 29
2. 3 Анализ экстрактов из культур Alternaria japonica, A. sonchi, A. tenuissima, полученных на
различных жидких и твердых питательных средах ...................................................................... 30
2. 4 Выделение и очистка вторичных метаболитов из культур Alternaria japonica, A. sonchi, A.
tenuissima, полученных на различных жидких и твердых питательных средах ........................ 31
2.5 Приборы и оборудование для выделения индивидуальных соединений ............................. 33
2. 6 Определение биологической активности исследуемых метаболитов.................................. 33
2.6.1. Энтомотоксическая активность......................................................................................... 33
2.6.2. Фитотоксическая активность............................................................................................. 35
2.6.3. Антибиотическая активность ............................................................................................ 35
2.6.4. Цитотоксическая активность ............................................................................................. 35
2. 7 Изучение возможности токсинов вызывать иммуносупрессию гусениц Galleria mellonella
(L.)...................................................................................................................................................... 36
2.7.1 Влияние тенуазоновой кислоты на восприимчивость вощинной огневки к грибной
инфекции пероральным методом................................................................................................ 36
2.7.2 Уровень общего количества гемоцитов в гемолимфе гусениц Galleria mellonella....... 37
2.7.3 Активность фенолоксидаз (ФО)......................................................................................... 37
2.7.4 Активность глутатион-S-трансфераз (ГСТ) и неспецифических эстераз (ЭСТ)........... 38
2.7.5 Анализ культивируемой микрофлоры среднего кишечника гусениц Galleria mellonella
......................................................................................................................................................... 38
2. 8 Статистическая обработка ........................................................................................................ 39
ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ И ХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ
МЕТАБОЛИТОВ ALTERNARIA JAPONICA, A. TENUISSIMA И A. SONCHI........................ 41
3.1 Идентификация и физиолого-биохимические свойства штаммов ........................................ 41
3
3.2 Влияние состава питательной среды и способа культивирования на образование
метаболитов исследуемых штаммов............................................................................................... 45
3. 3 Спектр биологической активности экстрактов ...................................................................... 54
3. 3. 1 Энтомотоксическая активность........................................................................................ 54
3. 3. 2 Фитотоксическая активность............................................................................................ 58
3. 3. 3 Антибиотическая активность ........................................................................................... 61
3. 3. 4 Цитотоксическая активность ............................................................................................ 63
3. 4 Анализ метаболитных профилей экстрактов.......................................................................... 68
3. 5 Оценка взаимосвязи типов активности и состава экстрактов............................................... 79
ГЛАВА 4. ЭНТОМОТОКСИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ТЕНУАЗОНОВОЙ КИСЛОТЫ... 84
4.1 Выделение и идентификация тенуазоновой кислоты из фильтрата культуры A. tenuissima
253-011............................................................................................................................................... 84
4.2. Энтомотоксические, акарицидные и цитотоксические свойства тенуазоновой кислоты.. 87
4.2.1 Пероральный эффект ........................................................................................................... 87
4.2.2 Остро-контактная активность............................................................................................. 89
4.2.3 Контактно-кишечная активность ....................................................................................... 90
4.2.4 Цитотоксическая активность .............................................................................................. 91
ГЛАВА 5. ИММУННЫЙ ОТВЕТ НАСЕКОМЫХ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ТЕНУАЗОНОВОЙ
КИСЛОТЫ .......................................................................................................................................... 95
5.1 Реакция клеточного и гуморального иммунитета гусениц Galleria mellonella (L.) при
действии тенуазоновой кислоты..................................................................................................... 95
ВЫВОДЫ........................................................................................................................................... 103
ЗАКЛЮЧЕНИЕ................................................................................................................................ 104
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ........................................................ 105
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.............................................................................................................. 106
ПРИЛОЖЕНИЯ ............................................................................................................................... 122
Приложение А................................................................................................................................. 122
Приложение Б ................................................................................................................................. 134
