Введение
Обзор литературы 10
1. Нейробластомы 10
1.1. Нервный гребень 11
1.2. Диагностика и терапия нейробластом 13
1.2.1. Гистология нейробластом 13
1.2.2. Классификация нейробластом 14
1.2.3. Терапия и прогноз 17
1.3. Генетические факторы, определяющие развитие нейробластом 18
1.3.1. Хромосомные аберрации и плоидность 18
1.3.2. N-Myc и NCYM 19
1.3.3. Генетическая предрасположенность 20
1.3.4. Мутации в других генах 21
2. Сигнальные каскады нейротрофинов в норме и в нейробластомах 23
2.1. Нейротрофины 23
2.2. Рецепторы нейротрофинов 24
2.3. Взаимодействие рецепторов нейротрофинов с p75NTR 25
2.4. Лиганд-независимая активация рецепторов нейротрофинов 27
2.5. TrkA в нейробластомах 30
2.5.1. Влияние TrkA на сигнальные каскады Ras-Erk и PI3K-Akt 30
2.5.2. Изоформа TrkAIII 31
2.6. TrkB в нейробластомах 31
2.6.1. Сигнальные каскады активируемые TrkB 32
2.6.2. Изоформы TrkB 32
2.7. TrkC и p75NTR в нейробластомах 33
3. Влияние ростовых факторов на прогрессию нейробластом 35
3.1. Инсулиноподобные факторы роста 35
3.2. EGF и VEGF 36
3.3. PDGF 37
4. Рецепторная тирозинкиназа KIT 38
4.1. Фактор роста стволовых клеток SCF 40
4.2. Структура гена и белка KIT 40
4.2.1. Изоформы KIT 41
4.2.2. Растворимая форма KIT 42
4.3. Активация и регуляция активности KIT 43
4.4. Сигнальные каскады активируемые KIT 46
4.4.1. PI3K/Akt 46
4.4.2. Семейство Src киназ 48
4.4.3. RAS/MAPK 49
4.4.4. Другие сигнальные каскады активируемые KIT 53
4.5. Взаимодействие с рецепторами 54
4.6. KIT в злокачественных заболеваниях 58
4.7. Особенности активации мутантных форм KIT 60
4.8. KIT в нейробластомах 62
Материалы и методы 65
Результаты и обсуждение 74
1. Подбор клеточных линий для исследования роли KIT 74
2. Конструирование лентивирусных векторов, направляющих экспрессию shРНК 75
3. Подавление экспрессии KIT в клетках нейробластом SK-N-AS и SH-SY5Y 76
4. Подавление экспрессии KIT ингибирует пролиферацию и индуцирует апоптоз в клетках нейробластомы SH-SY5Y 78
5. Подавление экспрессии KIT приводит к аресту клеточного цикла в клетках SH-SY5Y 80
6. Подавление экспрессии KIT приводит к активации промитотических сигнальных путей 83
7. Нейротрофины NGF и BDNF могут компенсировать потерянную активность KIT 89
8. Измерение активности Erk на уровне индивидуальных клеток 91
9. Клетки SH-SY5Y-shKIT становятся более чувствительными к действию ростовых факторов 10. Erk является важным компонентом компенсаторных механизмов в клетках нейробластомы 95
11. Иматиниб и FR180204 обладают синергическим действием на рост клеток нейробластом 98
12. FR180204 блокирует способность клеток нейробластом адаптироваться к действию иматиниба 101
Заключение 104
Список сокращений и условных обозначений 106
Список литературы: 108
