Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Сократительный аппарат запирательных мышц моллюсков 11
1.1.1. Структурно-функциональные особенности мышц двустворчатых моллюсков 11
1.1.2. Толстые нити запирательных мышц моллюсков 12
1.1.3. Тонкие нити запирательных мышц моллюсков 16
1.1.4. Взаимодействие толстых и тонких нитей в мышцах моллюсков 18
1.2. Твитчин гладких мышц моллюсков 23
1.2.1. Гигантские белки иммуноглобулинового суперсемейства 23
1.2.2. Взаимодействие Ф-актина с белками титинового семейства 24
1.2.3. Твитчин - регуляторный белок гладких мышц моллюсков 27
1.2.4. Di и D2 - участки фосфорилирования в молекуле твитчина 29
1.3. Механизм запирательного сокращения 32
1.3.1. Физиологические и биохимические аспекты запирательного тонуса моллюсков 32
1.3.2. «Парамиозиновая гипотеза» 34
1.3.3. «Мостиковая гипотеза» 35
1.3.4. Гипотеза «твитчин-актиновых мостиков» 36
Глава 2. Материал и методы исследования 38
2.1. Выделение сократительных белков из запирательных мышц моллюсков 38
2.1.1. Выделение толстых нитей 38
2.1.2. Экстракция поверхностных белков толстой нити 38
2.1.3. Фракция, содержащая «природный» Ф-актин 39
2.1.4. Фракция, содержащая твитчин и миород 39
2.1.5. Фракция, содержащая миозин и тропомиозин 40
2.1.6. Получение синтетического актомиозина 41
2.2. Выделение миозина из скелетных мышц кролика 41
2.3. Выделение актина из скелетных мышц кролика 42
2.4. ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле 43
2.5. Фосфорилирование твитчина 45
2.6. Использование лазерного дифракционного анализатора 45
2.7. Низкоскоростное и высокоскоростное центрифугирование 46
2.8. Измерение вязкости 47
2.9. Измерение АТФ-азной активности 47
2.10. Вспомогательные методы 49
Глава 3. Результаты исследования 51
3.1. Тестирование взаимодействия твитчина и Ф-актина оптическими методами 51
3.2. Измерения вязкости твитчин-актинового комплекса 56
3.3. Тестирование взаимодействия твитчина и Ф-актина низкоскоростным центрифугированием 59
3.4. Тестирование взаимодействия твитчина и Ф-актина высокоскоростным центрифугированием 61
3.5. Влияние твитчина на механохимическую активность актомиозина.. 64
Глава 4. Обсуждение результатов 73
4.1. Взаимодействие твитчина с фибриллярным актином 73
4.2. Регуляция твитчин-актинового взаимодействия 75
4.3. Влияние твитчина на свойства актомиозина 76
4.4. «Парамиозиновая» и «мостиковая» гипотезы запирательного сокращения в свете современных экспериментальных данных 77
4.5. Гипотеза «твитчин-актиновых мостиков» 80
4.6. Предполагаемый молекулярный механизм запирательного сокращения 82
Выводы 84
Список литературы
