ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………………. 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ............................................................................. 17
1.1 Гидролитические ферменты холерных вибрионов……………………………… 17
1.2 Значение гидролаз в вирулентности микроорганизмов…………………………. 29
1.3 Зимографические методы детекции и анализа гидролитических ферментов…. 33
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ....................................................................... 47
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ..................................................................... 47
2.1 Объекты исследования…………………………………………………………….. 47
2.1.1 Штаммы бактерий……………………………………………………………….. 47
2.2 Питательные среды и реактивы…………………………………………………... 52
2.3 Микробиологические методы……………………………………………………... 53
2.4 Аналитические методы……………………………………………………………. 54
2.4.1 Определение химического состава....................................................................... 54
2.4.2 Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях………………………….. 54
2.4.3 Масс-спектрометрический анализ……………………………………………... 54
2.5 Препаративные методы……………………………………………………………. 55
2.5.1 Аффинная хроматография……………………………………………………… 55
2.6 Гемагглютинационные методы…………………………………………………… 55
2.7 Зимографические методы анализа………………………………………………... 55
2.7.1 Реакция радиальной энзимодиффузии в геле…………………………………... 55
2.7.2 Одномерный субстратный электрофорез…………………………………….. 56
2.8 Молекулярно-генетические методы……………………………………………… 59
2.9 Статистическая обработка данных……………………………………………….. 59
2.10 Основное оборудование и приборы……………………………………………... 60
3
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ БЕСКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ШТАММОВ V. CHOLERAE O1 И O139 СЕРОГРУПП РАЗНОЙ ЭПИДЗНАЧИМОСТИ………………………………………………………………..
62
3.1 Получение и физико-химическая характеристика препаратов наружных мембран V. cholerae O1 и O139 серогрупп……………………………………………
62
3.2 Получение и физико-химическая характеристика препаратов мочевинных экстрактов V. cholerae O1 и O139 серогрупп…………………………………………
64
3.3 Получение и физико-химическая характеристика препаратов супернатантов культуральной жидкости V. cholerae O1 и O139 серогрупп…………………………
64
ГЛАВА 4. ЗИМОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРЕПАРАТОВ БЕСКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ШТАММОВ V. CHOLERAE И O1 O139 СЕРОГРУПП РАЗНОЙ ЭПИДЗНАЧИМОСТИ…………………………………..
68
4.1 ПЦР-скрининг штаммов V. cholerae на наличие гена ompT, кодирующего основной белок наружной мембраны…………………………………………………
70
4.1.2 Анализ гидролаз препаратов наружных мембран, полученных из штаммов V. cholerae O1 и O139 серогрупп различного происхождения и эпидзначимости..........
72
4.2 Зимографический анализ гидролаз мочевинных экстрактов V. cholerae O1 и O139 серогрупп…………………………………………………………………………
79
4.3 Зимографический анализ гидролаз супернатантов культуральной жидкости V. cholerae O1 и O139 серогрупп…………………………………………………………
90
4.4 Оптимизация способа определения липолитической активности в бесклеточных фракциях V. cholerae в реакции радиальной энзимодиффузии……...
104
4.5 Оптимизация методики проведения субстратного электрофореза в полиакриламидном геле………………………………………………………………..
111
ГЛАВА 5. ВЫДЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА ГИДРОЛАЗ ИЗ БЕСКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ ШТАММОВ V. CHOLERAE O1 И O139 СЕРОГРУПП РАЗНОЙ ЭПИДЗНАЧИМОСТИ…………………………………..
114
5.1 Выделение протеазы из препарата мочевинного экстракта V. cholerae O1 El Tor M-878……………………………………………………………………………………
114
4
5.2 Физико-химическая характеристика и зимографический анализ препарата протеазы, выделенной из мочевинного экстракта V. cholerae El Tor M-878………...
114
ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………………………..
120
ВЫВОДЫ........................................................................................................................
130
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ……………...
131
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………………
133
