Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 14
1.1. Туберкулез 14
1.1.1. Иммунопатогенез туберкулеза 15
1.1.2. Основные принципы лечения туберкулеза 18
1.2. Использование наночастиц в медицине 20
1.2.1. Углеродные нанотрубки 21
1.2.2. Наночастицы серебра 25
1.3. Токсичность наночастиц серебра 30
1.3.1. Свойства наночастиц серебра, определяющие токсичность 30
1.3.2. Токсикодинамика наночастиц серебра 36
1.3.3. Токсикокинетика наночастиц серебра 39
1.3.4. Иммунотоксичность наночастиц серебра 42
1.4. Заключение по обзору литературы 45
собственные исследования 47
Глава 2. Материалы и методы 47
2.1. Микробиологические методы 47
2.1.1. Штаммы микроорганизмов 47
2.1.2. Среды и условия культивирования микроорганизмов 47
2.1.3.Определение бактерицидной эффективности наночастиц in vitro 48
2.1.4.Определение обсемененности органов животных M. tuberculosis 49
2.1.5. Изучение действия наночастиц серебра, покрытых поливинилпирро лидоном, на модели хронического туберкулеза у мышей линии C57Bl/6 49
2.2. Биотехнологические методы 49
2.2.1. Наночастицы серебра 49
2.2.2. Углеродные нанотрубки 50
2.3. Биологические методы 50
2.3.1. Лабораторные животные 50
2.3.2. Обработка мышей наночастицами 51
2.3.3. Мышиная модель экспериментального хронического туберкулеза 2.4. Гистологические методы 52
2.5. Иммунологические методы 52
2.4.1.Получение первичных культур иммунокомпетентных клеток экспериментальных животных 52
2.4.2.Методы исследования функциональной активности иммунокомпетентных клеток 54
2.6. Микроскопические методы
2.6.1. Электронная микроскопия 58
2.6.2. Атомно-силовая микроскопия 58
2.7. Методы статистической обработки результатов 59
Результаты и обсуждение 60
Глава 3. Характеристика наночастиц серебра и углеродных нанотрубок и изучение их бактерицидной активности в экспериментах in vitro 60
3.1. Определение физических параметров наночастиц серебра и углеродных нанотрубок 60
3.2. Изучение бактерицидной активности наночастиц серебра и углеродных нанотрубок в отношении Mycobacterium tuberculosis H37Rv, Salmonella enerica 4412, Francisella tularensis 15 НИИЭГ в экспериментах in vitro
3.2.1. Изучение бактерицидного действия наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидоном, в отношении M. tuberculosis H37Rv, S. enterica 4412, F. tularensis 15 НИИЭГ in vitro 64
3.2.2. Изучение бактерицидного действия наночастиц серебра без покрытия в отношении M. tuberculosis H37Rv, S. enterica 4412, F. tularensis 15 НИИЭГ in vitro 65
3.2.3. Изучение бактерицидного действия углеродных нанотрубок в отно шении M. tuberculosis H37Rv, S. enterica 4412, F. tularensis 15 НИИЭГ in vitro 66
3.3. Заключение по Главе 3 66
Глава 4. Изучение воздействия наночастиц серебра и углеродных нанотрубок на иммунокомпетентные клетки первичных культур тканей в экспериментах in vitro
4.1. Изучение цитотоксических свойств наночастиц серебра и углеродных нанотрубок 68
4.2. Изучение влияния наночастиц серебра и углеродных нанотрубок на продукцию активных форм кислорода нейтрофилами перитонеального экссудата мышей 75
4.3. Изучение воздействия наночастиц серебра, покрытых поливинилпир-ролидоном, на продукцию провоспалительных цитокинов спленоцитами мыши в условиях in vitro 78
4.4. Заключение по Главе 4 79
Глава 5. Изучение воздействия наночастиц серебра и углеродных нанотрубок наиммуннуюсистемумышейв зависимостиотпутивведения 81
5.1. Изучение воздействия наночастиц серебра на иммунную систему мышей после многократного введения ингаляционным, подкожным или внут-рижелудочным способом
5.1.1. Гистологическое исследование органов мышей после многократного введения наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидоном 82
5.1.2. Определение количества белка, содержащегося в жидкости бронхо-легочного лаважа, после ингаляционного введения наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидоном 84
5.1.3. Изучение цитотоксического воздействия наночастиц серебра на спленоциты мышей после введения их различными способами 85
5.1.4. Изучение воздействия наночастиц серебра, покрытых поливинилпир-ролидоном, на субпопуляционный состав лимфоцитов селезенки 86
5.1.5. Изучение воздействия наночастиц серебра, покрытых поливинилпир-ролидоном, на продукцию провоспалительных цитокинов у экспериментальных мышей 87
5.2. Изучение воздействия углеродных нанотрубок на иммунную систему мышей после многократного введения ингаляционным, подкожным или внутрижелудочным способом 89
5.2.1. Гистологическое исследование органов мышей после многократного воздействия углеродных нанотрубок 89
5.2.2. Определение количества белка, содержащегося в жидкости бронхо-легочного лаважа 90
5.2.3. Изучение цитотоксического воздействия углеродных нанотрубок на спленоциты мышей после введения их различными способами 91
5.2.4. Изучение воздействия углеродных нанотрубок на субпопуляционный состав лимфоцитов селезенки мышей в зависимости от пути введения в организм 93
5.2.5. Изучение воздействия углеродных нанотрубок на продукцию про-воспалительных цитокинов у экспериментальных мышей 94
5.3. Заключение по Главе 5 94
Глава 6. Изучение антибактериального действия наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидоном, на модели хронически больных туберкулезом мышей линии C57BL/6 98
6.1. Воздействие наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидоном, на обсемененность легких и селезенок бактериями M. tuberculosis мышей линии C57Bl/6 98
6.2. Оценка иммунологических показателей хронически больных туберку 6
лезом мышей линии C57Bl/6 после ингаляционного введения
наночастиц серебра, покрытых поливинилпирролидо ном 100
6.2.1. Определение субпопуляционного состава лимфоцитов селезенки мышей 100
6.2.2. Определение количества цитокинпродуцирующих Т-лимфоцитов в селезенке мышей 101
6.2.3. Определение уровня цитокинов в сыворотке крови и жидкости брон-хо-легочного лаважа мышей 103
6.2.4. Определение количества белка, содержащегося в жидкости бронхо-легочного лаважа мышей 108
6.2.5. Изучение воздействия наночастиц серебра, покрытых поливинилпир-ролидоном, на продукцию активных форм кислорода нейтрофилами мышей, больных туберкулезом 109
6.3. Заключение по Главе 6 112
Заключение 115
Выводы 118
Список принятых сокращений, условных обозначений,
Символов, единиц и терминов 120
Список использованной литературы
