Введение
Глава 1. Обзор литературы 13
1.1. Семейство глиального нейротрофического фактора (GDNF) 13
1.2. Рецепторы глиального нейротрофического фактора (GDNF) 1.2.1. Семейство GFR1 корецепторов глиального нейротрофического фактора (GDNF) 16
1.2.2. Рецептор тирозинкиназы Ret 18
1.3. Модель рецепторной сигнализации глиального нейротрофического фактора (GDNF)21
1.3.1. Ret-опосредованные сигнальные пути GDNF 21
1.3.1.1. МАР – сигнальный каскад GDNF 21
1.3.1.2. PI3K/Akt – сигнальный каскад GDNF 24
1.3.2. Ret независимые сигнальные пути GDNF 25
1.4. Роль GluR2-субъединицы AMPA-рецепторов в нейрональной пластичности 26
1.5. Патохимическое действие ишемии, ишемические каскады 27
2. Материалы и методы исследования 34
2.1. Объект исследования 34
2.2. Схема экспериментов
2.2.1. Схема экспериментов in vitro 34
2.2.2. Схема экспериментов in vivo 37
2.3. Методы исследования in vitro 39
2.3.1. Метод культивирования диссоциированных клеток гиппокампа 39
2.3.2. Моделирование нормобарической гипоксии in vitro 40
2.3.3. Моделирование глюкозной депривации in vitro 40
2.3.4. Оценка выживаемости клеток после моделирования стресс-условий in vitro 41
2.3.5. Мультиэлектродные методы исследования спонтанной биоэлектической активности 2.3.6. Метод кросс-корреляционных графов 43
2.3.7. Метод прижизненной детекции РНК-зондов 45
2.4. Методы исследования in vivo 47
2.4.1. Моделирование острой гипобарической гипоксии in vivo 47
2.4.2. Оценка выживаемости животных в условиях острой гипобарической гипоксии 47
2.4.3. Поведенческие тесты 48
2.4.3.1 Тест «открытое поле» 48
2.4.3.2. Метод исследования навигационного научения и долговременной памяти –
водный лабиринт Морриса 49
2.5. Статистическая обработка результатов 51
Глава 3. Результаты и их обсуждение з
3.1. Влияние GDNF на спонтанную биоэлектрическую активность первичных культур клеток гиппокампа in vitro 52
3.2. Нейропротекторное и антигипоксическое действие GDNF при моделировании отдельных факторов ишемии
3.2.1. Влияние GDNF на жизнеспособность клеток первичной культуры гиппокампа при моделировании глюкозной депривации in vitro 58
3.2.2. Влияние GDNF на спонтанную биоэлектрическую активность диссоциированных культур гиппокампа при моделировании глюкозной депривации in vitro 60
3.2.3. Влияние GDNF на жизнеспособность клеток первичной культуры гиппокампа при моделировании нормобарической гипоксии in vitro 67
3.2.4. Влияние GDNF на спонтанную биоэлектрическую активность диссоциированных культур гиппокампа при моделировании гипоксии in vitro 69
3.2.5. Влияние GDNF на возможность восстановления спонтанной биоэлектрической активности первичных культур гиппокампа 81
3.2.6. Влияние GDNF на экспрессию мРНК GluR2 при моделировании гипоксии 84
3.2.7. Влияние GDNF на выживаемость животных при моделировании острой гипобарической гипоксии in vivo 87
3.2.8. Влияние GDNF на показатели двигательной и ориентировочно-исследовательской активности мышей в тесте «Открытое поле» 92
3.2.9. Влияние GDNF на показатели долговременной памяти мышей в тесте «Водный лабиринт Морриса» 98
Заключение 102
Выводы 106
Список использованной литературы 107
