Введение
1. CLASS Введени CLASS е 5
Актуальность проблемы , 5
Цели и задачи исследования 6
Основные положения, выносимые на защиту 6
Научная новизна работы 7
Теоретическое и практическое значение работы 7
Апробация работы , .. 8
Личный вклад 8
2. Обзор литературы 9
2.1. Роль модифицированных лпнп в атерогенезе 9
2.2. Иммунные факторы в атерогенезе. роль иммунного ответа на модифицированные лпнп в атерогенезе 12
2.3. Типы модифицированных лпнп, обнаруженные vivo. иммуногенные эпитопы, возникающие при модификации 16
2.3.1. Окислительная модификация ЛПНП. 16
Перекисно-модифицированные ЛПНП 16
Инициаторы перекисного окисления ЛПНП in vivo 20
Разнообразие эпитопов, возникающих при перекисной модифиции липопротеинов in vivo 21
Изменение химических и физико-химических свойств ЛПНП при перекисном окислении 26
Другие механизмы окисления ЛПНП in vivo 27
Окисление ЛПНП, индуцированное пероксидазоЙ 27
Участие миелопероксидазы в окислении ЛПНП 28
2.3.2. Гликированные ЛПНП. 29
2.3.3. Десиалированные ЛПНП. 34
2.3.4. Протеолиз апо В. 35
3. Материалы и методы 37
3.1. Пациенты и образцы плазмы крови 37
3.2. Выделение лпнп человека 37
3.3. Химическая модификация лпнп 37
3.4. Получение кроличьих антисывороток к модифицированным лпнп 39
3.5. Выделение аутоантител к модифицированным лпнп (аффинная хроматография) 39
3.6. Твердофазный иммуноферментный анализ (т-ифа) 40
3.6.1 Анализ активности антител 40
Выявление аутоантител плазмы крови человека 40
Анализ активности кроличьих антисывороток 41
3.6.2. Конкурентный анализ. 41
Конкуренция между антигенами 41
Конкуреция между человеческими и кроличьими антителами к м-ЛПНП 41
3.6.3. Определение содержания окисленных ЛПНП в плазме 42
3.7. Определение холестерина циркулирующих иммунных комплексов 42
3.8. Определение концентрации гомоцистеина в плазме крови человека 42
3.9. Иммуногистохимический анализ 43
3.10. Получение экстракта стенки аорты человека 43
3.11. Изучение захвата иммунных комплексов «м-лпнп - аат» макрофагами. 44
3.12. Изучение цитотоксического эффекта иммунных комплексов лпі-іп-антитело 45
3.13. Статистическая обработка результатов 46
4. Результаты исследований 47
4.1. Обнаружение и характеристика антилипопротеиновых антител человека 47
4J.1. Поиск модификаций ЛПНП, ответственных за выработку антител 47
4.1.2. Влияние степени модификации ЛПНП на эффективность связывания с антителами 50
4.1.3. Изучение специфичности человеческих аутоантител к м-ЛПНП. 51
4.1.4. Взаимодействие ААТ к м-ЛПНП с другими модифицированными белками 54
4.1.5. Аутоантитела к м-ЛПНП, выделенные методом аффинной хроматографии. 57
4.1.6. Аутоантитела из экстрактов аорты человека. 58
4.2. Кроличьи аутоантитела к модифицированным лпнп 59
4.3. Уровень циркулирующих аат к м-лпнп человека и клинические проявления атеросклероза , 62
4.3.1. Разработка метода определения уровня ААТ. 62
4.3.2. Содержание аутоантител к м-ЛПНП в крови человека 64
4.3.3. Анализ взаимосвязи между содержанием ААТ в крови и клиническими проявлениями атеросклероза. 66
Частота обнаружения ААТ к м-ЛПНП у человека 67
Взаимосвязь уровня ААТ с клиническими проявлениями атеросклероза 68
Соотношение уровня ААТ с другими факторами риска ИБС 73
Дислипопротеинемия 73
Гипертоническая болезнь 73
Курение 74
Гипергомоцистеинемия 74
Содержание в крови окисленных ЛПНП 75
Содержание в крови аутоиммунных комплексов ЛПНП-антитело 76
4.4. Обнаружение эпитопов модифицированных лпнп в стенке аорты человека. 78
4.5. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ АУТОАНТИТЕЛ к м-ЛПНП 85
4.5.1. Влияние ААТ на захват модифицированных ЛПНП макрофагами. 85
4.5.2. Влияние ААТ на цитотоксичность модифицированных ЛПНП. 88
5. Обсуждение результатов 89
6. Выводы 100
7. Список цитируемой литературы 101
