Введение
2. Литературный обзор. Равновесные и кинетические исследования денатурации и ренатурации белков 9
2.1. Основные определения 9
2.2. Равновесные состояния белков в различных денатурирующих условиях 12
2.2.1. Денатурация хлоридом 13
2.2.2. Денатурация другими солями гуанидина 19
2.2.3. Денатурация мочевиной 21
2.2.4. Температурно-денатурированное состояние 22
2.2.5. Денатурация изменением рН 33
2.2.6. Денатурация неорганическими солями 37
2.2.7. Другие типы денатурации 38
2.3. Промежуточные состояния на пути денатурации и ренатурации белков 41
2.3.1. Равновесные исследования
2.3.2. Кинетические исследования 46
2.4. Объекты исследования 53
2.4.1. Коровий о(-лактальбумин 53
2.4.2. Человеческий об-лактальбумин 62
2.4.3. Карбоангидраза В 64
3. Материалы и методы 71
3.1. Выделение и очистка препаратов 71
3.1.1. Коровий of-лактальбумин 71
3.1.2. Человеческий 0(-лактальбумин 73
3.1.3. Карбоангидраза В 74
3.2. Приготовление растворов 77
3.3. Методы исследования 78
4. Результаты и обсуждение 88
4.1. Промежуточные формы коровьего Об-лактадъбушна 88
4.1.1. Кислая форма 88
4.1.2. Тешературно-денатурированная форма 108
4.2. Промежуточные формы человеческого обчяактальбумина 112
4.3. Роль кальция в структуре оС-лактальбуминов 122
4.4. Промежуточные формы карбоангидразы В 124
4.4.1. Кислая форма 125
4.4.2. Промежуточная по гуанидинхлориду форма 136
4.5. Состояние расплавленной глобулы как особое физическое состояние белковой молекулы 137
4.5.1. Физическая природа состояния расплавленной глобулы 137
4.5.2. Фазовые переходы между нативным состоянием и состоянием расплавленной глобулы 142
4.5.3. Физические критерии нативности глобулярного белка 146
4.6. Кинетические исследования карбоангидразы В. Роль состояния расплавленной глобулы в самоорганизации белка 148
4.6.1. Кинетика ренатурации карбоангидразы В из развернутого состояния 149
4.6.2. Кинетика ренатурации карбоангидразы В из состояния расплавленной глобулы 151
4.6.3. Лежит ли состояние расплавленной глобулы на прямом пути сворачивания? 153
5. Заключение 154
6. Выводы 156
Список литературы 159
