Введение
Обзор литературы. Рассеянные повторяющиеся.элементы генома эукариот 8
Общая характеристика рассеянных повторяющихся элементов 9
Длинные рассеянные.повторы: элементы с.варьирующей локализацией 14
Короткие рассеянные повторы ; вездесущие последовательности генома млекопитающих 22
Экспрессия рассеянных повторяющихся.элементов.генома эукариот 36
Экспериментальная часть 49
Материалы и методы 50
1. Бактериальные штаммы и.векторы..для.клонирова-. ния 50
2. Получение поли (А)-содержащей мРНК из клеток асцитной карциномы Эрлиха и.печени.мыши 50
3. Получение ядерной пре-мРНК 53
4. Электрофоретическое фракционирование РНК.в агарозном геле и перенос на ДБМ-фильтры 54
5. Выделение ДНК плазмиды pBR322 55
6. Получение библиотеки клонов кДНК на основе цитоплазматической полиШ^ТРНК печени мыши 57
7. Приготовление.меченых,тест-проб для гибридазации 58
8. Детектирование и отбор рекомбинантных.клонов. Метод гибридизации с колониями 60
9. Выделение рекомбинантной ДНК 63
10. Обработка.ДНК.рестрикционными эндонуклеазами 63
11. Фракционирование ДНК с помощью электрофореза... 64
12. Перенос ДНК из агарозного геля на нитроцеллюлозные фильтры ; блотт-гибридизация. 65
13. Выделение вставочных фрагментов ДНК 66
14. Концевое мечение.32Р.двуцепочечных.фрагментов ДНК 68
15. Разделение цепей ДНК в ПААГ 69
16. Выделение меченых дву- и.одноцепочечных фрагментов ДНК из ПААГ ; 70
17. Определение первичной структуры ДНК 71
Результаты 75
1. Получение библиотеки клонов кДНК на основе цитоплазматической поли(A)*PHK печени мыши и отбор рекомбинантов, содержащих.повторы BI и В2 76
2. Рестрикционный анализ рекомбинантных клонов, содержащих последовательности, го мологичные В-элементам: определение.типа клонированных В-элементов 78
3. Анализ первичной структуры четырех клонированных кДНК, содержащих повторяющийся элемент В2 ; полная копия В2-последовательности представлена в одной из мажорных.полиаденилированных мРНК печени мыши ..;.. 82
4. ВмРНКу - основной тип В2-содержащих мРНК печени мыши. Соседствование повтора В2 и уникальной (слабповторяющейся) последовательности внутри транскрипта ;. 89
5. Универсальная ориентация повторяющихся последовательностей семейства В2 в полисомных и питоплазматических поли(А)+РНК клеток асцитной карциномы и печени мыши 93
Обсуждение результатов 97
Выводы 109
Список литературы 112
