Введение
1. Введение 5
1.1. Актуальность темы исследования 5
1.2. Степень разработанности темы исследования 5
1.3. Цель и задачи исследования 7
1.4. Научная новизна работы 8
1.5. Теоретическая и практическая значимость работы 8
1.6. Методология и методы исследования 9
1.7. Положения, выносимые на защиту 9
1.8. Степень достоверности и апробация результатов 10
1.9. Структура и объем диссертации 10
2. Обзор литературы 11
2.1. Роль амилоида- в патогенезе болезни Альцгеймера 11
2.1.1. Болезнь Альцгеймера – клинические проявления и патоморфологические характеристики 11
2.1.2. Протеолитический процессинг АРР и изоформы -амилоидного пептида 12
2.1.3. Агрегаты и олигомеры амилоида- 14
2.1.4. Гипотеза амилоидного каскада 20
2.1.5. Внутриклеточный амилоид-
2.2. Взаимодействие нуклеиновых кислот с амилоидом- 24
2.3. Роль ионов цинка в возникновении и развитии болезни
Альцгеймера 28
2.3.1. Гомеостаз цинка и болезнь Альцгеймера 28
2.3.2. Влияние оксидативного и нитрозирующего стрессов на внутриклеточный гомеостаз цинка 30
2.3.3. Взаимодействие ионов цинка с мономерной и агрегированными формами амилоида- 32 2.3.4. Цинк-индуцированная агрегация амилоида- 36
2.3.5. Роль гистидиновых остатков металл-связывающего домена в цинк-индуцированной агрегации амилоида-
2.4. Физико-химические методы характеризации агрегатов амилоида- 40
2.5. Исследование межмолекулярных взаимодействий методом поверхностного плазмонного резонанса 43
3. Материалы и методы исследования 46
3.1. Объекты и материалы 46
3.1.1. Реагенты и буферные растворы 46
3.1.2. Синтетические пептиды 46
3.1.3. Агрегаты амилоида- 49
3.1.4. Нуклеиновые кислоты 50
3.1.5. Сульфированные и несульфированные полисахариды 53
3.2. Методы исследований 54
3.2.1. Биосенсорный анализ с использованием эффекта поверхностного плазмонного резонанса 54
3.2.2. Турбидиметрия 56
3.2.3. Динамическое рассеяние света 57
3.2.4. Флуориметрия с использованием красителя «тиофлавин Т» 57
3.2.5. Электрохимический метод 58
3.2.6. Седиментационный анализ и ультрафильтрация 59
4. Результаты и обсуждение 62
4.1. Металл-связывающий домен как цинк-зависимый сайт
взаимодействия амилоида- с нуклеиновыми кислотами 62
4.1.1. Цинк-индуцированное взаимодействие пептидов, моделирующих металл-связывающий домен, с нуклеиновыми кислотами 62
4.1.2. Влияние точечных мутаций на цинк-индуцированное взаимодействие металл-связывающего домена А с нуклеиновыми кислотами 69
4.1.3. Влияние цинк-индуцированной олигомеризации модельных пептидов А16 на их взаимодействие с нуклеиновыми кислотами 74
4.1.4. Роль аминокислотных остатков гистидина в цинк-индуцированном взаимодействии А16 с нуклеиновыми кислотами 83
4.2. Эффект ионов цинка на взаимодействие нуклеиновых кислот с фибриллярными агрегатами амилоида- 86
4.2.1. Характеризация фибриллярных агрегатов амилоида- 88
4.2.2. Влияние ионов цинка на связывание нуклеиновых кислот с фибриллярными агрегатами амилоида- 96
4.2.3. Стабильность комплексов ДНК с фибриллярными агрегатами амилоида-: эффект ионов цинка 102
4.3. Связывание нуклеиновых кислот с цинк-индуцированными агрегатами амилоида- 107
5. Заключение 116
6. Выводы 118
7. Список сокращений и условных обозначений 119
8. Список цитируемой литературы 121
Благодарности
