Введение
1. Аналитический обзор литературы 12
1.1 Особенности роста и метаболизма опухолевой ткани 12
1.2 Белковые биомаркеры опухолевых клеток 15
1.3 Основные направления противоопухолевой терапии 17
1.4 Противоопухолевая терапия с использованием аптамеров
1.4.1 Аптамеры, получение, свойства 19
1.4.2 Аптамеры как противоопухолевые препараты 23
1.4.3 Аптамеры как основа конъюгатов для противоопухолевой терапии 25
1.5 Магнитные и золотые наночастицы для противоопухолевой терапии 27
1.6 Адресная доставка препаратов 30
1.7 Селективная фототермальная абляция и гипертермия 34
1.8 Биораспределение и токсичность золотых и магнитных наночастиц 37
2. Материалы и методы исследований 41
2.1 Материалы и оборудование 41
2.2 Объекты исследования 42
2.3 Трансплантация асцитной карциномы Эрлиха
2.4 Выделение асцитных клеток 43
2.5 Расчет концентрации асцитных клеток 43
2.6 Получение конъюгатов аптамеров с терапевтическими свойствами 44
2.6.1 Получение конъюгатов арабиногалактана с оцДНК-аптамерами 44
2.6.2 Получение комплексов микродисков с оцДНК-аптамерами 44
2.6.2.1 Получение, отмывка микродисков с подложки и функционализация микродисков ДНК-аптамерами 44
2.6.3 Получение комплексов наночастиц золота с оцДНК-аптамерами 46
2.7 Исследование способности арабиногалактана осуществлять
транспорт олигонуклеотидов в нормальные и опухолевые клетки 47
2.7.1 Трансфекция плазмиды, несущей ген EGFP-белка, в асцитные клетки условиях in vitro 49
2.7.2 Трансфекция плазмиды, содержащей ген EGFP, в условиях in vivo 50
2.7.3 Детекция экспрессии белка GFP в клетках 50
2.8 Исследование противоопухолевого эффекта комплекса арабиногалактана с ДНК-аптамерами in vitro и in vivo
2.9 Исследование противоопухолевого эффекта магнитных микродисков, функционализированных ДНК-аптамерами, в условиях воздействия низкочастотного переменного магнитного поля 51
2.10 Исследование противоопухолевого эффекта гипертермии, вызванной плазмонным резонансом золотых наночастиц, функционализированных ДНК-аптамерами
2.10.1 Исследование противоопухолевого эффекта гипертермии, вызванной плазмонным резонансом золотых наночастиц, функционализированных ДНК-аптамерами, в условиях in vitro 52
2.10.2 Исследование противоопухолевого эффекта гипертермии, вызванной плазмонным резонансом золотых наночастиц, функционализированных ДНК-аптамерами, в условиях in vivo 53
2.10.3 Фототермическая элиминация опухоли 54
2.11 Определение уровня пролиферации опухолевых клеток 55
2.12 Определение уровня опухолевых клеток в состоянии апоптоза 56
2.13 Исследование токсичности функционализированных ДНК аптамерами магнитных микродисков и золотых наночастиц 57
2.13.1 Определение общего билирубина в плазме крови методом Ендрассика-Грофа 57
2.13.2 Определение общего холестерина в плазме крови энзиматическим колориметрическим методом 58
2.13.3 Определение общего белка в плазме крови биуретовым методом 60
2.13.4 Определение активности аланинаминотрансферазы в плазме крови методом Райтмана-Френкеля 61
2.13.5 Определение активности щелочной фосфатазы в плазме крови унифицированным методом с П-нитрофенилфосфатом 62
2.14 Окрашивание срезов тканей гематоксилином и эозином 63
2.15 Оценка уровня пролиферации 64
2.16 Определение уровня апоптоза 64
2.17 Статистические методы исследования 65
3. Результаты исследований и их обсуждение 66
3.1 Трансфекция аптамеров в клетку с помощью арабиногалактана 66
3.2 Противоопухолевая терапия с помощью конъюгатов арабиногалактана с ДНК-аптамерами к внутриклеточным мишеням 76
3.2.1 Исследование противоопухолевого эффекта конъюгатов арабиногалктана с ДНК-аптамерами in vitro 76
3.2.2 Исследование противоопухолевого эффекта конъюгатов арабиногалктана с ДНК-аптамерами in vivo 78
3.3 Исследование противоопухолевого эффекта магнитных микродисков, функционализированных ДНК-аптамерами 80
3.3.1 Исследование противоопухолевого эффекта магнитных микродисков, функционализированных ДНК-аптамерами, in vitro 80
3.3.2 Исследование противоопухолевого эффекта магнитных микродисков, функционализированных ДНК-аптамерами, in vivo 84
3.4 Исследование противоопухолевого эффекта функционализированных ДНК-аптамерами золотых наночастиц 85
3.4.1 Исследование противоопухолевого эффекта функционализированных ДНК-аптамерами золотых наночастиц in vitro 85
3.4.2 Исследование противоопухолевого эффекта гипертермии in vivo 90
3.5 Исследование токсичности магнитных микродисков и золотых наночастиц 95
Заключение 102
Выводы 111
Список использованных источников
